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第2年
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PCR反應(yīng)Taq DNA聚合酶是什么 一般TaqDNA聚合酶活性半衰期為92.5℃130min，95℃40min，97℃5min?，F(xiàn)在人們又發(fā)現(xiàn)許多新的耐熱的DNA聚合酶，這些酶的活性在高溫下活性可維持更長(zhǎng)時(shí)間。TaqDNA聚合酶的酶活性單位定義為74℃下，30min，摻入10nmol/LdNTP到核酸中所需的酶量。TaqDNA聚合酶的一個(gè)致命弱點(diǎn)是它的出錯(cuò)率，一般PCR中出錯(cuò)率為2×10-4核苷酸/每輪循環(huán)，在利用PCR克隆和進(jìn)行序發(fā)布時(shí)間：2025-01-20 10:48 點(diǎn)擊次數(shù)：134 次
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酶的活性及濃度的調(diào)節(jié)方式 調(diào)節(jié)酶的濃度酶濃度的調(diào)節(jié)主要有兩種方式，一種是誘導(dǎo)或抑制劑的合成;一種是調(diào)節(jié)酶的降解。調(diào)節(jié)酶的活性**通過與細(xì)胞膜或細(xì)胞內(nèi)受體相結(jié)合而引起一系列生物學(xué)效應(yīng)，以此來調(diào)節(jié)酶活性。反饋抑制調(diào)節(jié)許多小分子物質(zhì)的合成是由一連串的反應(yīng)組成的，催化此物質(zhì)生成的第1步的酶，往往被它們的終端產(chǎn)物抑制。這種抑制叫反饋抑制(feedbackinhibition)。例如由蘇氨酸生物合成為異亮氨酸，要經(jīng)過5步，反應(yīng)第1步有發(fā)布時(shí)間：2025-01-16 13:34 點(diǎn)擊次數(shù)：153 次
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MTT法測(cè)細(xì)胞相對(duì)數(shù)和相對(duì)活力 活細(xì)胞中的琥珀酸脫氫酶可使MTT分解產(chǎn)生蘭色結(jié)晶狀甲贊顆粒積于細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞周圍。其量與細(xì)胞數(shù)呈正比，也與細(xì)胞活力呈正比。 細(xì)胞懸液以1000rpm離心10分鐘，棄上清液。 沉淀加入0.5－1mlMTT，吹打成懸液。 37℃下保溫2小時(shí)。 加入4—5ml酸化異丙醇（定容），打勻。發(fā)布時(shí)間：2025-01-10 10:11 點(diǎn)擊次數(shù)：176 次
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PCR反應(yīng)沒有目的片段考慮方面 PCR反應(yīng)沒有目的片段考慮方面:1.含有PCR反應(yīng)抑制物對(duì)樣本稀釋(l:100和1:1000)后再擴(kuò)增，并通過在已知陽性模板中加入原始PCR混合物進(jìn)行擴(kuò)增，驗(yàn)證抑制物的存在；2.模板濃度太低，擴(kuò)增循環(huán)數(shù)不夠盡可能降低退火溫度，在降落PCR的低溫度增加10個(gè)擴(kuò)增循環(huán)；3.非特異擴(kuò)增增加起始模板的變性溫度(通常為95℃5min)，采用降落PCR和熱啟動(dòng)PCR4.擴(kuò)增反應(yīng)混合液中各成分濃度不對(duì)改變Taq發(fā)布時(shí)間：2024-12-24 16:54 點(diǎn)擊次數(shù)：259 次
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反向 PCR的特點(diǎn) 常規(guī)PCR是擴(kuò)增兩引物之間的DNA片段,反向PCR(reversePCR)是用引物來擴(kuò)增兩引物以外的DNA片段。一般先用限制性內(nèi)切酶酶解DNA(目的基因中不存在該酶的酶切位點(diǎn),且片段應(yīng)短于2～3kb),然后用連接酶使帶有黏性末端的靶片段自身環(huán)化,后用一對(duì)反向引物進(jìn)行PCR,得到的線性DNA將含有兩引物外側(cè)的未知序列。該技術(shù)可對(duì)未知序列擴(kuò)增后進(jìn)行分析,如探索鄰接已知DNA片段的序列。反向PCR已成功發(fā)布時(shí)間：2024-12-17 16:59 點(diǎn)擊次數(shù)：251 次
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細(xì)胞培養(yǎng)一般過程 細(xì)胞培養(yǎng)一般過程：1、細(xì)胞傳代（貼壁細(xì)胞）：試劑：PBS,胰酶，含血清的培養(yǎng)基；流程：顯微鏡下看一看培養(yǎng)皿里的細(xì)胞多不多，太多（80%~90%）會(huì)導(dǎo)致代謝廢物很多，先吸掉廢液，再用PBS洗一洗，同時(shí)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞黏在一起，這時(shí)候就需要加點(diǎn)胰酶消除它們之間的粘性，是否消除完，在顯微鏡下看一看，看完加入適宜的含血清的培養(yǎng)基，中和一下胰酶，這叫吹打，除此之外，細(xì)胞太多了，把一部分細(xì)胞移出來，加入適量的培發(fā)布時(shí)間：2024-12-10 11:51 點(diǎn)擊次數(shù)：173 次
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ELISA試劑盒檢測(cè)目的抗原辨別方法 利用干擾實(shí)驗(yàn)即可辨別ELISA試劑盒是否檢測(cè)目的抗原，方法如下：1、將針對(duì)試劑盒特異性的重組蛋白抗原和試劑盒中的檢測(cè)抗體配置成antibody:antigen≈1:2的混合孵育液。2、37℃孵育15分鐘后，代替原試劑盒中的檢測(cè)抗體3、后續(xù)操作按照試劑盒說明書進(jìn)行，加檢測(cè)抗體、酶復(fù)合物和底物4、實(shí)驗(yàn)完畢后，檢測(cè)其標(biāo)準(zhǔn)曲線，如果標(biāo)準(zhǔn)曲線良好則說明加入的目的抗原和試劑盒抗體不匹配，試劑盒檢測(cè)抗體針對(duì)的是發(fā)布時(shí)間：2024-12-02 10:46 點(diǎn)擊次數(shù)：174 次
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ELISA檢測(cè)試劑盒試驗(yàn)常見標(biāo)本處理 ELISA檢測(cè)試劑盒試驗(yàn)常見標(biāo)本處理：1.血清：室溫血液私人凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細(xì)收集上清，如有沉淀形成，應(yīng)再次離心3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000發(fā)布時(shí)間：2024-11-25 10:37 點(diǎn)擊次數(shù)：157 次
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PCR反應(yīng)的主要物質(zhì)解說 參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+詳細(xì)解說：1.引物引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。2.酶及其濃度目前有兩種TaqDNA聚合酶，一種是從棲熱水生桿菌中提純的天然酶，另一種為大腸菌合成的基因工程酶。催化發(fā)布時(shí)間：2024-11-18 10:37 點(diǎn)擊次數(shù)：241 次
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大鼠ELISA檢測(cè)試劑盒試驗(yàn)血清解凍過程 大鼠ELISA檢測(cè)試劑盒試驗(yàn)血清解凍過程：1、請(qǐng)勿將血清置于37℃太久，若在37℃放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。2、按照所建議的逐步解凍法(-2O℃至4℃至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。3、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。4、隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度發(fā)布時(shí)間：2024-11-11 16:08 點(diǎn)擊次數(shù)：220 次
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選擇DNA提取試劑盒考慮因素 選擇合適的DNA提取試劑盒是進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟。以下是選擇DNA提取試劑盒時(shí)需要考慮的幾個(gè)因素：1、樣本類型：不同的樣本類型（如血液、組織、植物、**、土壤等）可能需要不同的提取方法。確保選擇的試劑盒適用于你的樣本類型。2、DNA純度要求：根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的需求，你可能需要高純度的DNA。一些試劑盒專門設(shè)計(jì)用于去除PCR抑制劑，這對(duì)于后續(xù)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（如PCR、qPCR）尤為重要。3、D發(fā)布時(shí)間：2024-11-04 15:23 點(diǎn)擊次數(shù)：157 次
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PCR反應(yīng)內(nèi)參基因的三大作用 PCR反應(yīng)內(nèi)參基因的三大作用：1.樣品提取質(zhì)量的判斷標(biāo)準(zhǔn)在PCR實(shí)驗(yàn)中，內(nèi)參基因首先作為判斷樣品提取是否成功的標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)使用逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，如果結(jié)果為陰性，不能直接得出樣品中沒有目的基因的結(jié)論。只有當(dāng)內(nèi)參基因的CT值處于一個(gè)合理的范圍內(nèi)，例如20左右，我們才能確信樣品制備沒有問題，從而確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。2.目的基因表達(dá)量的計(jì)算基礎(chǔ)在進(jìn)行相對(duì)定量PCR時(shí)，內(nèi)參基因是計(jì)算目的基發(fā)布時(shí)間：2024-10-29 11:04 點(diǎn)擊次數(shù)：722 次
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普通pcr引物設(shè)計(jì)和熒光定量pcr引物設(shè)計(jì)差異 普通pcr引物設(shè)計(jì)和熒光定量pcr引物設(shè)計(jì)的區(qū)別一、方法不同1、普通pcr引物設(shè)計(jì)：引物的優(yōu)劣直接關(guān)系到PCR的特異性與成功與否。2、熒光定量pcr引物設(shè)計(jì)：通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針，標(biāo)記跟蹤PCR產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)反應(yīng)，利用與之相適應(yīng)的軟件對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析，計(jì)算待測(cè)樣品模板的初始濃度二、原理不同1、普通pcr引物設(shè)計(jì)：為了找到一對(duì)合適的核苷酸片段，使其能有效地?cái)U(kuò)增模板DNA序列。2、熒光定發(fā)布時(shí)間：2024-10-25 13:53 點(diǎn)擊次數(shù)：606 次
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ELISA實(shí)驗(yàn)操控的儀器操作技能 為了使終究的ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)效果就要較高的可靠性，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)開端前有必要好的前期準(zhǔn)備作業(yè)包括對(duì)實(shí)驗(yàn)所需的儀器進(jìn)行質(zhì)控。使儀器堅(jiān)持作業(yè)狀況，應(yīng)建立維護(hù)和校對(duì)儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，常見需求操控的儀器包括：移液器（加樣槍）、溫箱、洗板機(jī)和酶標(biāo)儀。具體質(zhì)控操作技能整理的如下要求： 1、洗板機(jī)：每個(gè)設(shè)置洗板后的殘留液有各自的規(guī)矩，一般不逾越2μl；人工扣板時(shí)，墊紙不濕；守時(shí)檢查管孔是否阻塞。2、酶標(biāo)儀：常常發(fā)布時(shí)間：2024-10-21 10:58 點(diǎn)擊次數(shù)：189 次
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ELISA實(shí)驗(yàn)各項(xiàng)條件的選擇 在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括:1、固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。2、包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相發(fā)布時(shí)間：2024-10-14 16:43 點(diǎn)擊次數(shù)：232 次