Pfu DNA Polymerase
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
產(chǎn)品包裝
產(chǎn)品價格
XY0217
1000U
130.00元
Pfu DNA Polymerase簡稱Pfu酶，是*常用的高保真DNA聚合酶之一。 Pfu DNA Polymerase是一種來源于嗜熱菌Pyrococcus furiosus的高度熱穩(wěn)定的DNA聚合酶。Pfu酶的分子量為90kDa。Pfu酶可以催化5’至3’方向的依賴于DNA模板的脫氧核苷酸的聚合。和Taq酶不同，Pfu酶有3’至5’的外切酶活性(proofreading activity)。另外，Pfu酶有5’至3’外切酶活性，但Pfu酶沒有反轉(zhuǎn)錄酶活性。 由于Pfu酶有3’至5’的外切酶活性，因此在PCR擴增過程中出錯的幾率大大降低，出錯率為2.6×10-6 per nt per cycle。 Pfu的出錯率不僅遠遠低于Taq酶，也低于一些其它的高保真DNA聚合酶例如Vent、DeepVent、Pwo、Tli等，因此Pfu酶常作為優(yōu)選的高性價比的高保真DNA聚合酶。 來源：本Pfu DNA Polymerase為recombinant Pfu DNA Polymerase，通過大腸桿菌表達純化獲得，和純化獲得的天然Pfu DNA Polymerase在各方面的性質(zhì)相同。 用途：高保真PCR (high fidelity PCR)、點突變、雙平端PCR克隆等。 Pfu酶擴增出來的DNA片段為雙平端，可以用于雙平端克隆，但不能用于常規(guī)的T載體克隆。 dUTP和dITP或含有dUTP和dITP的引物不能用于Pfu酶介導(dǎo)的PCR擴增反應(yīng)。 活性定義：One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 72℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 20 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 2 mM MgSO4, 10 mM (NH4)2SO4, 10 mM KCl, 0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP. 純度：不含DNA內(nèi)切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，滿足常規(guī)PCR反應(yīng)要求。 酶儲存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 8.2), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.1% (v/v) Nonidet P40, 0.1% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。 10X Pfu Buffer (with Mg2+)：200 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 100 mM (NH4)2SO4, 20 mM MgSO4, 100 mM KCl, 1% (v/v) Triton X-100, 1 mg/ml BSA。 失活或抑制：酚氯仿抽提可以使Pfu酶失活。 包裝清單：
包裝
XY0217-1
Pfu DNA Polymerase (5U/μl)
XY0217-2
10X Pfu Buffer (with Mg2+)
1ml×5
—
說明書
1份
保存條件： -20℃保存。 注意事項： 由于PCR反應(yīng)非常靈敏可以擴增目的基因序列超過1000萬倍，在使用Pfu酶時請注意避免微量待擴增DNA的污染，并盡量考慮設(shè)置不加模板的空白對照以確認是否有待擴增DNA的污染。 Pfu DNA polymerase在擴增DNA片段時的出錯率非常低，但其擴增效率也比較低。對于出錯率要求不高的情況，例如RT-PCR進行定量或半定量，推薦使用Taq DNA polymerase。在擴增效率和出錯率需要兼顧的情況，可以選擇BeyoTaq DNA polymerase。在擴增2kb以下DNA片段時，Pfu酶和Taq酶的擴增效率相近。在準確性要求很高的情況下，須選擇Pfu酶。 Pfu酶有3’至5’的外切酶活性，在沒有dNTP的情況下可以降解引物。因此Pfu酶一定要*后加入，并且要在冰浴上操作。 不能使用Taq酶的PCR Buffer來替代Pfu酶的PCR Buffer。 本產(chǎn)品**于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或**，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。 為了您的**和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。