BeyoRT? II M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶(RNase H-) (試用裝)

      BeyoRT? II M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶(RNase H-)，即BeyoRT? II M-MLV reverse transcriptase (RNase H-)，是一種經(jīng)過改造和優(yōu)化的M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶，具有正常的依賴于RNA或DNA模板的DNA聚合酶活性，能夠以RNA或DNA為模板，在引物存在的情況下進(jìn)行互補(bǔ)DNA鏈的合成，即可以進(jìn)行cDNA(complementary DNA)的**鏈合成。
      本產(chǎn)品是*常用的反轉(zhuǎn)錄酶之一，廣泛用于獲得總RNA或mRNA后cDNA**條鏈的合成，后續(xù)可以用于PCR、real-time PCR也稱定量PCR(quantitative PCR, qPCR)、cDNA的**鏈合成以及cDNA文庫(kù)的構(gòu)建等。BeyoRT? II M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶(RNase H-)還可以通過反轉(zhuǎn)錄用于DNA探針的熒光、生物素、地高辛或同位素標(biāo)記等，也可以通過引物延伸(primer extention)來分析和研究RNA。
      M-MLV (Moloney Murine Leukemia Virus)，也稱MMLV或M-MuLV；反轉(zhuǎn)錄酶(reverse transcriptase)也稱逆轉(zhuǎn)錄酶或RT酶。
      本產(chǎn)品無RNase H活性，反轉(zhuǎn)錄效率高、產(chǎn)物長(zhǎng)度長(zhǎng)。本產(chǎn)品與野生型M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶相比，無RNase H活性，不能選擇性剪切RNA和DNA雜合雙鏈中的RNA，從而有助于高效合成長(zhǎng)度更長(zhǎng)的cDNA。本產(chǎn)品經(jīng)測(cè)試可以輕松完成長(zhǎng)度為8 kb及以下基因的反轉(zhuǎn)錄(參考圖1)，反轉(zhuǎn)錄的*大長(zhǎng)度可以超過10 kb。

      圖1. 使用BeyoRT? II M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶(RNase H-)反轉(zhuǎn)錄總RNA后，對(duì)于不同長(zhǎng)度的cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增后的電泳效果圖。圖中可見對(duì)于0.2-8kb的cDNA可以非常高效地被反轉(zhuǎn)錄。

      本產(chǎn)品熱穩(wěn)定性高。*適反應(yīng)溫度為42-45℃，但當(dāng)溫度達(dá)到50℃時(shí)仍具有很高活性，且可獲得較高產(chǎn)量的cDNA (圖2)。

      圖2. BeyoRT? II M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶(RNase H-)在不同溫度下的反轉(zhuǎn)錄效果。用從NIH3T3細(xì)胞抽提獲得的總RNA 500 ng，在20μl的反轉(zhuǎn)錄體系中按照?qǐng)D中所示溫度進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。反轉(zhuǎn)錄完成后取1μl反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)品進(jìn)行目的基因的PCR擴(kuò)增和電泳。

      本產(chǎn)品性價(jià)比高。BeyoRT? II M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶(RNase H-)是一種大腸桿菌重組高表達(dá)的的反轉(zhuǎn)錄酶，由于其表達(dá)量非常高，大大提高了本產(chǎn)品的性價(jià)比。本反轉(zhuǎn)錄酶含有從Moloney Murine Leukemia Virus reverse transcriptase基因克隆的缺失RNase H domain的pol基因，并進(jìn)行了突變優(yōu)化以提高其熱穩(wěn)定性、反轉(zhuǎn)錄效率和表達(dá)量。
      酶活性定義：One unit of the enzyme incorporates 1 nmol of dTTP into acid-precipitable material in 10 min at
37℃ using poly(A)·oligo(dT) _12-18 as template-primer。反應(yīng)體系為 50 mM Tris-HCl(pH 8.3), 75 mM KCl, 3 mM MgCl₂, 10 mM DTT, 0.5mM [³H]-dTTP and 0.4 mM polyA·oligo(dT)_12-18。
      純度：不含DNA內(nèi)切酶、外切酶和磷酸酯酶和RNA酶，可以滿足常規(guī)反轉(zhuǎn)錄合成cDNA**條鏈等的需要。
      酶儲(chǔ)存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 300 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.01% NP-40 and 50% glycerol。
      失活或抑制：80℃孵育10分鐘可以導(dǎo)致M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶(RNase H-)失活；EDTA、EGTA等螯合劑、無機(jī)磷酸鹽或焦磷酸鹽以及聚氨(polyamine)對(duì)M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶(RNase H-)有抑制作用。
      本產(chǎn)品中M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶(RNase H-)的濃度為200U/μl，用于體積為20微升的反轉(zhuǎn)錄體系時(shí)足夠進(jìn)行10次反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。
包裝清單：

保存條件：
      -20℃保存。
注意事項(xiàng)： 
      對(duì)于GC含量比較高的RNA的反轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)品的使用說明中都給予了特別說明，請(qǐng)予以關(guān)注。
      本產(chǎn)品**于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或**，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的**和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 

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