T4 DNA Ligase

      T4 DNA Ligase即T4 DNA連接酶，可以催化粘端或平端雙鏈DNA或RNA的5'-P末端和3'-OH末端之間以磷酸二酯鍵結(jié)合，該催化反應(yīng)需ATP作為輔助因子。同時T4 DNA 連接酶可以修補雙鏈DNA、雙鏈RNA或DNA/RNA雜合物上的單鏈缺刻(single-strand nicks)。
      用途：T4 DNA Ligase常用于DNA片段和載體、linker或adaptor等的連接。也可以用于缺刻修復(fù)及Ligase介導(dǎo)的RNA檢測。
      來源：本T4 DNA Ligase由大腸桿菌表達(dá)，表達(dá)基因的來源為T4嗜菌體。
      活性定義：One unit is defined as the amount of enzyme required to give 50% ligation of HindIII fragments of
lambda DNA in 30 min at 16℃ in 20 μl of the assay mixture containing 50 mM Tris, pH 7.5, 10 mM MgCl2, 10 mM DTT, 1 mM ATP, 25 μg/ml BSA and a 5'-DNA termini concentration of 0.12 μM (300 μg/ml)。200U等于1個Weiss unit，以Weiss unit計，本產(chǎn)品共200單位。
      T4 DNA Ligase連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)后涂板LB平板的效果參考圖1。

      圖1. 本T4 DNA Ligase的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)**后涂板獲得的LB平板效果圖。A. 雙酶切后的載體自連過夜；B. 雙酶切后的載體與待插入片段過夜連接。
      純度：不含DNA內(nèi)切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，滿足常規(guī)連接反應(yīng)要求。
      酶儲存溶液：20 mM Tris, pH 7.5, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA and 50% (v/v) glycerol。
      10X Ligation Buffer：400 mM Tris, pH 7.8, 100 mM MgCl2, 100 mM DTT, 5 mM ATP。
      失活或抑制：65℃孵育10分鐘可以導(dǎo)致T4 DNA Ligase失活；NaCl或KCl濃度大于200mM時強烈抑制T4 DNA Ligase。

包裝清單：

保存條件：
      -20℃保存。
注意事項：
      對于普通的轉(zhuǎn)化大腸桿菌的操作，不必對連接產(chǎn)物進行純化，連接產(chǎn)物可以直接用于轉(zhuǎn)化。但用電轉(zhuǎn)方法轉(zhuǎn)化大腸桿菌時，通常宜先用DNA純化試劑盒或酚氯仿抽提方法等純化DNA，然后再進行電轉(zhuǎn)。
      需進行平端連接或快速連接時，推薦使用的快速DNA連接試劑盒(XY2002/XY2003)。T4 DNA Ligase可以進行平端連接，但效率較低。
      普通連接反應(yīng)不必進行凝膠電泳觀察。如果需要對于連接產(chǎn)物進行凝膠電泳觀察，推薦先在65℃孵育10分鐘使
T4 DNA Ligase失活，以避免T4 DNA Ligase和DNA結(jié)合導(dǎo)致的條帶位置遷移(band shift)。
      本產(chǎn)品**于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或**，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的**和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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