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產(chǎn)品資料

pET-Dual-N-GST-PreScission

pET-Dual-N-GST-PreScission
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  • 產(chǎn)品名稱：pET-Dual-N-GST-PreScission
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  • 產(chǎn)品展商：XYbscience
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簡(jiǎn)單介紹
pET-Dual-N-GST-PreScission是一種用于在大腸桿菌中高效共表達(dá)兩種目的蛋白的質(zhì)粒，其中一種可以帶上GST標(biāo)簽(Glutathione S-transferase tag, GST tag)并且GST標(biāo)簽后有PreScission蛋白酶的酶切位點(diǎn)。pET-Dual-N-GST-PreScission本質(zhì)粒包含兩個(gè)多克隆位點(diǎn)(MCS)，每個(gè)多克隆位點(diǎn)前都有一個(gè)T7啟動(dòng)子/lac操作子和一個(gè)核糖體結(jié)合位點(diǎn) (rbs)，因此都可以在異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的誘導(dǎo)下高效啟動(dòng)目的蛋白的表達(dá)。本質(zhì)粒為氨芐青霉素抗性。
產(chǎn)品描述

pET-Dual-N-GST-PreScission

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品包裝

產(chǎn)品價(jià)格

XY2933

pET-Dual-N-GST-PreScission

1μg

888.00元

      pET-Dual-N-GST-PreScission是一種用于在大腸桿菌中高效共表達(dá)兩種目的蛋白的質(zhì)粒，其中一種可以帶上GST標(biāo)簽(Glutathione S-transferase tag, GST tag)并且GST標(biāo)簽后有PreScission蛋白酶的酶切位點(diǎn)。本質(zhì)粒包含兩個(gè)多克隆位點(diǎn)(MCS)，每個(gè)多克隆位點(diǎn)前都有一個(gè)T7啟動(dòng)子/lac操作子和一個(gè)核糖體結(jié)合位點(diǎn) (rbs)，因此都可以在異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的誘導(dǎo)下高效啟動(dòng)目的蛋白的表達(dá)。本質(zhì)粒為氨芐青霉素抗性。
      在共表達(dá)兩個(gè)蛋白的復(fù)合物時(shí)，通常宜把較難表達(dá)的基因克隆到**個(gè)多克隆位點(diǎn)，宜把較易表達(dá)的基因克隆到**個(gè)多克隆位點(diǎn)。這樣通過(guò)GST柱純化，可分離純化獲得帶有GST標(biāo)簽的蛋白復(fù)合物。本質(zhì)粒的N端GST標(biāo)簽與**個(gè)多克隆位點(diǎn)之間有PreScission蛋白酶識(shí)別的八肽序列LEVLFQGP，對(duì)應(yīng)核酸序列為CTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCC，配合使用生產(chǎn)的PreScission Protease (XY2302/XY2303) 4℃酶切過(guò)夜，**天收集穿柱液即可獲得蛋白復(fù)合物，這為后續(xù)進(jìn)行蛋白復(fù)合物的功能檢測(cè)、蛋白結(jié)晶等工作帶來(lái)了極大的便利。PreScission蛋白酶酶切發(fā)生在八肽序列的Q和G之間，因此在酶切去除GST標(biāo)簽的時(shí)候會(huì)在目的蛋白的N端留下兩個(gè)額外的氨基酸殘基GP。當(dāng)然，本質(zhì)粒也可以只在**個(gè)多克隆位點(diǎn)插入目的基因，這樣就會(huì)僅表達(dá)一個(gè)含有N端GST標(biāo)簽和PreScission識(shí)別位點(diǎn)的目的蛋白。
      pET-Dual-N-GST-PreScission質(zhì)粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide

Position

T7 transcription start-1

1

GST-taq coding sequence

71-727

PreScission Protease recognation site sequence

728-751

Multiple cloning sites-1(BamH I – NotI)

752-802

T7 promoter-2

859-875

T7 transcription start-2

876

Multiple cloing sites-2(Nde I – XhoI)

943-1004

S Tag coding sequence

1011-1055

T7 terminator

1107-1154

f1 origin

1192-1639

bla(Ap) coding sequence

1764-2621

pBR322 origin

3382

lacI coding sequence

4576-5658

T7 promoter-1

6049-6065

      pET-Dual-N-GST-PreScission質(zhì)粒(6065bp)的圖譜如下：


      pET-Dual-N-GST的多克隆位點(diǎn)的詳細(xì)圖譜如下：

Lacoperator

1

 GGGGAATTGT    GAGCGGATAA    CAATTCCCCT    CTAGAAATAA    TTTTGTTTAA

 CCCCTTAACA    CTCGCCTATT    GTTAAGGGGA    GATCTTTATT    AAAACAAATT

rbsGST

51

 CTTTAAGAAG    GAGATATACC    ATGGGCTCCC    CTATACTAGG    TTATTGGAAA

 GAAATTCTTC    CTCTATATGG    TACCCGAGGG    GATATGATCC    AATAACCTTT

101

 ATTAAGGGCC    TTGTGCAACC    CACTCGACTT    CTTTTGGAAT    ATCTTGAAGA

 TAATTCCCGG    AACACGTTGG    GTGAGCTGAA    GAAAACCTTA    TAGAACTTCT

151

 AAAATATGAA    GAGCATTTGT    ATGAGCGCGA    TGAAGGTGAT    AAATGGCGAA

 TTTTATACTT    CTCGTAAACA    TACTCGCGCT    ACTTCCACTA    TTTACCGCTT

201

 ACAAAAAGTT    TGAATTGGGT    TTGGAGTTTC    CCAATCTTCC    TTATTATATT

 TGTTTTTCAA    ACTTAACCCA    AACCTCAAAG    GGTTAGAAGG    AATAATATAA

251

 GATGGTGATG    TTAAATTAAC    ACAGTCTATG    GCCATCATAC    GTTATATAGC

 CTACCACTAC    AATTTAATTG    TGTCAGATAC    CGGTAGTATG    CAATATATCG

301

 TGACAAGCAC    AACATGTTGG    GTGGTTGTCC    AAAAGAGCGT    GCAGAGATTT

 ACTGTTCGTG    TTGTACAACC    CACCAACAGG    TTTTCTCGCA    CGTCTCTAAA

351

 CAATGCTTGA    AGGAGCGGTT    TTGGATATTA    GATACGGTGT    TTCGAGAATT

 GTTACGAACT    TCCTCGCCAA    AACCTATAAT    CTATGCCACA    AAGCTCTTAA

401

 GCATATAGTA    AAGACTTTGA    AACTCTCAAA    GTTGATTTTC    TTAGCAAGCT

 CGTATATCAT    TTCTGAAACT    TTGAGAGTTT    CAACTAAAAG    AATCGTTCGA

451

 ACCTGAAATG    CTGAAAATGT    TCGAAGATCG    TTTATGTCAT    AAAACATATT

 TGGACTTTAC    GACTTTTACA    AGCTTCTAGC    AAATACAGTA    TTTTGTATAA

501

 TAAATGGTGA    TCATGTAACC    CATCCTGACT    TCATGTTGTA    TGACGCTCTT

 ATTTACCACT    AGTACATTGG    GTAGGACTGA    AGTACAACAT    ACTGCGAGAA

551

 GATGTTGTTT    TATACATGGA    CCCAATGTGC    CTGGATGCGT    TCCCAAAATT

 CTACAACAAA    ATATGTACCT    GGGTTACACG    GACCTACGCA    AGGGTTTTAA

601

 AGTTTGTTTT    AAAAAACGTA    TTGAAGCTAT    CCCACAAATT    GATAAGTACT

 TCAAACAAAA    TTTTTTGCAT    AACTTCGATA    GGGTGTTTAA    CTATTCATGA

651

 TGAAATCCAG    CAAGTATATA    GCATGGCCTT    TGCAGGGCTG    GCAAGCCACG

 ACTTTAGGTC    GTTCATATAT    CGTACCGGAA    ACGTCCCGAC    CGTTCGGTGC

PreScission

 ↓

701

 TTTGGTGGTG    GCGACCATCC    TCCAAAACTG    GAAGTTCTGT    TCCAGGGGCC

 AAACCACCAC    CGCTGGTAGG    AGGTTTTGAC    CTTCAAGACA    AGGTCCCCGG

NotI

 

 BamHIEcoRISacIAscIPstISalIHindIII

751

 CGGATCCGAA    TTCGAGCTCG    GCGCGCCTGC    AGGTCGACAA    GCTTGCGGCC

 GCCTAGGCTT    AAGCTCGAGC    CGCGCGGACG    TCCAGCTGTT    CGAACGCCGG

801

 GCTAATGCTT    AAGTCGAACA    GAAAGTAATC    GTATTGTACA    CGGCCGCATA

 CGATTACGAA    TTCAGCTTGT    CTTTCATTAG    CATAACATGT    GCCGGCGTAT

T7transcription-2→

T7promoter2 

 Lacoperator

851

 ATCGAAATTA    ATACGACTCA    CTATAGGGGA    ATTGTGAGCG    GATAACAATT

 TAGCTTTAAT    TATGCTGAGT    GATATCCCCT    TAACACTCGC    CTATTGTTAA

rbsNdeIBglII

901

 CCCCATCTTA    GTATATTAGT    TAAGTATAAG    AAGGAGATAT    ACATATGGCA

 GGGGTAGAAT    CATATAATCA    ATTCATATTC    TTCCTCTATA    TGTATACCGT

MunIEcoRVFseIAatIIKpnIXhoI

951

 GATCTCAATT    GGATATCGGC    CGGCCACGCG    ATCGCTGACG    TCGGTACCCT

 CTAGAGTTAA    CCTATAGCCG    GCCGGTGCGC    TAGCGACTGC    AGCCATGGGA

      pET-Dual-N-GST-PreScission中沒(méi)有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pET-Dual-N-GST-PreScission)包括：

AgeI

AleI

BbvCI

BmgBI

BmtI

BseRI

BsiWI

BsmI

Bsu36I

CspCI

NheI

NruI

NsiI

PmeI

PmlI

PspAI

RsrII

SacII

SexAI

SfiI

SmaI

SnaBI

SpeI

SrfI

StuI

TspMI

XmaI

      pET-Dual-N-GST-PreScission中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pET-Dual-N-GST-PreScission once)包括：

XbaI

T`CTAG,A

30

PspXI

VC`TCGA,GB

999

NcoI

C`CATG,G

69

AvaI

C`YCGR,G

999

MscI

TGG|CCA

281

BsoBI

C`YCGR,G

999

BstBI

TT`CG,AA

471

PaeR7I

C`TCGA,G

999

SwaI

ATTT|AAAT

501

XhoI

C`TCGA,G

999

BamHI

G`GATC,C

752

PacI

TTA,AT`TAA

1072

EcoRI

G`AATT,C

758

AvrII

C`CTAG,G

1078

Eco53kI

GAG|CTC

766

BlpI

GC`TNA,GC

1096

SacI

G,AGCT`C

764

DraIII

CAC,NNN`GTG

1421

BfuAI

ACCTGCNNNN`NNNN,

770

PsiI

TTA|TAA

1549

BspMI

ACCTGCNNNN`NNNN,

770

SspI

AAT|ATT

1629

AscI

GG`CGCG,CC

771

AhdI

GACNN,N`NNGTC

1833

PstI

C,TGCA`G

777

BsaI

GGTCTCN`NNNN,

1895

SbfI

CC,TGCA`GG

777

BglI

GCCN,NNN`NGGC

1951

SalI

G`TCGA,C

783

FspI

TGC|GCA

2056

HindIII

A`AGCT,T

789

AlwNI

CAG,NNN`CTG

3027

NotI

GC`GGCC,GC

796

BstZ17I

GTA|TAC

3672

AflII

C`TTAA,G

808

Tth111I

GACN`N,NGTC

3697

BsrGI

T`GTAC,A

835

PflFI

GACN`N,NGTC

3697

NdeI

CA`TA,TG

943

Bpu10I

CC`TNA,GC

4334

BglII

A`GATC,T

950

PpuMI

RG`GWC,CY

4434

MfeI

C`AATT,G

956

HpaI

GTT|AAC

4801

EcoRV

GAT|ATC

964

BstEII

G`GTNAC,C

5121

FseI

GG,CCGG`CC

969

MluI

A`CGCG,T

5303

AsiSI

GCG,AT`CGC

980

BstAPI

GCAN,NNN`NTGC

5624

ZraI

GAC|GTC

989

SphI

G,CATG`C

5832

AatII

G,ACGT`C

987

SgrAI

CR`CCGG,YG

5984

Acc65I

G`GTAC,C

993

ClaI

AT`CG,AT

6028

KpnI

G,GTAC`C

993

BspDI

AT`CG,AT

6028

      pET-Dual-N-GST-PreScission質(zhì)粒中推薦使用的測(cè)序引物序列如下：
      MCS1-N Primer (626-647): 5′-GCTATCCCACAAATTGATAAGT-3′
      MCS1-C Primer (853-834): 5′-GATTATGCGGCCGTGTACAA-3′ 
      MCS2-N Primer (834-853): 5′-TTGTACACGGCCGCATAATC-3′
      T7 terminator Primer (1093-1111): 5′-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′ 
      pET-Dual-N-GST-PreScission的全序列信息：XY2933 pET-Dual-N-GST-PreScission.txt。
包裝清單：

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

包裝

XY2933

pET-Dual-N-GST-PreScission

1μg

—

說(shuō)明書

1份

保存條件：
      -20℃保存。
注意事項(xiàng)：
      本質(zhì)粒未經(jīng)書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個(gè)人或單位。
      本產(chǎn)品**于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或**，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的**和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

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