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產(chǎn)品資料

pET-Dual-N-GST

pET-Dual-N-GST
  • 如果您對(duì)該產(chǎn)品感興趣的話(huà)，可以
  • 產(chǎn)品名稱(chēng)：pET-Dual-N-GST
  • 產(chǎn)品型號(hào)：
  • 產(chǎn)品展商：XYbscience
  • 產(chǎn)品文檔：無(wú)相關(guān)文檔
簡(jiǎn)單介紹
pET-Dual-N-GST是一種用于在大腸桿菌中高效共表達(dá)兩種目的蛋白的質(zhì)粒，其中一種蛋白可以帶上GST標(biāo)簽(Glutathione S-transferase tag, GST tag)。本質(zhì)粒包含兩個(gè)多克隆位點(diǎn)(MCS)，每個(gè)多克隆位點(diǎn)前都有一個(gè)T7啟動(dòng)子/lac操作子和一個(gè)核糖體結(jié)合位點(diǎn) (rbs)，因此都可以在異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的誘導(dǎo)下高效啟動(dòng)目的蛋白的表達(dá)。pET-Dual-N-GST本質(zhì)粒為氨芐青霉素抗性。
產(chǎn)品描述

pET-Dual-N-GST

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱(chēng)

產(chǎn)品包裝

產(chǎn)品價(jià)格

XY2931

pET-Dual-N-GST

1μg

888.00元

      pET-Dual-N-GST是一種用于在大腸桿菌中高效共表達(dá)兩種目的蛋白的質(zhì)粒，其中一種蛋白可以帶上GST標(biāo)簽(Glutathione S-transferase tag, GST tag)。本質(zhì)粒包含兩個(gè)多克隆位點(diǎn)(MCS)，每個(gè)多克隆位點(diǎn)前都有一個(gè)T7啟動(dòng)子/lac操作子和一個(gè)核糖體結(jié)合位點(diǎn) (rbs)，因此都可以在異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的誘導(dǎo)下高效啟動(dòng)目的蛋白的表達(dá)。本質(zhì)粒為氨芐青霉素抗性。
      在共表達(dá)兩個(gè)蛋白的復(fù)合物時(shí)，通常宜把較難表達(dá)的基因克隆到**個(gè)多克隆位點(diǎn)，并在其N端引物設(shè)計(jì)時(shí)加入PreScission蛋白酶識(shí)別的八肽序列(LEVLFQGP)，宜把較易表達(dá)的基因克隆到**個(gè)多克隆位點(diǎn)。這樣通過(guò)GST柱純化，可分離純化獲得帶有GST標(biāo)簽的蛋白復(fù)合物，配合使用生產(chǎn)的PreScission Protease (XY2302/XY2303) 4℃酶切過(guò)夜，**天收集穿柱液即可獲得蛋白復(fù)合物，這為后續(xù)進(jìn)行蛋白復(fù)合物的功能檢測(cè)、蛋白結(jié)晶等工作帶來(lái)了極大的便利。PreScission蛋白酶酶切發(fā)生在八肽序列的Q和G之間，因此在酶切去除GST標(biāo)簽的時(shí)候會(huì)在目的蛋白的N端留下兩個(gè)額外的氨基酸殘基GP。當(dāng)然，本質(zhì)粒也可以只在**個(gè)多克隆位點(diǎn)插入目的基因，這樣就會(huì)僅表達(dá)一個(gè)含有N端GST標(biāo)簽的目的蛋白。
      pET-Dual-N-GST質(zhì)粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide

Position

T7 transcription start-1

1

GST-taq coding sequence

71-727

Multiple cloning sites-1(BamH I – NotI)

730-780

T7 promoter-2

838-854

T7 transcription start-2

855

Multiple cloing sites-2(Nde I – XhoI)

922-983

S Tag coding sequence

990-1034

T7 terminator

1086-1133

f1 origin

1171-1618

bla(Ap) coding sequence

1743-2600

pBR322 origin

3361

lacI coding sequence

4555-5637

T7 promoter-1

6028-6044

      pET-Dual-N-GST質(zhì)粒(6044bp)的圖譜如下：


      pET-Dual-N-GST的多克隆位點(diǎn)的詳細(xì)圖譜如下：

Lacoperator

  1

 GGGGAATTGT    GAGCGGATAA    CAATTCCCCT    CTAGAAATAA    TTTTGTTTAA

 CCCCTTAACA    CTCGCCTATT    GTTAAGGGGA    GATCTTTATT    AAAACAAATT

rbsGST

 51

 CTTTAAGAAG    GAGATATACC    ATGGGCTCCC    CTATACTAGG    TTATTGGAAA

 GAAATTCTTC    CTCTATATGG    TACCCGAGGG    GATATGATCC    AATAACCTTT

101

 ATTAAGGGCC    TTGTGCAACC    CACTCGACTT    CTTTTGGAAT    ATCTTGAAGA

 TAATTCCCGG    AACACGTTGG    GTGAGCTGAA    GAAAACCTTA    TAGAACTTCT

151

 AAAATATGAA    GAGCATTTGT    ATGAGCGCGA    TGAAGGTGAT    AAATGGCGAA

 TTTTATACTT    CTCGTAAACA    TACTCGCGCT    ACTTCCACTA    TTTACCGCTT

201

 ACAAAAAGTT    TGAATTGGGT    TTGGAGTTTC    CCAATCTTCC    TTATTATATT

 TGTTTTTCAA    ACTTAACCCA    AACCTCAAAG    GGTTAGAAGG    AATAATATAA

251

 GATGGTGATG    TTAAATTAAC    ACAGTCTATG    GCCATCATAC    GTTATATAGC

 CTACCACTAC    AATTTAATTG    TGTCAGATAC    CGGTAGTATG    CAATATATCG

301

 TGACAAGCAC    AACATGTTGG    GTGGTTGTCC    AAAAGAGCGT    GCAGAGATTT

 ACTGTTCGTG    TTGTACAACC    CACCAACAGG    TTTTCTCGCA    CGTCTCTAAA

351

 CAATGCTTGA    AGGAGCGGTT    TTGGATATTA    GATACGGTGT    TTCGAGAATT

 GTTACGAACT    TCCTCGCCAA    AACCTATAAT    CTATGCCACA    AAGCTCTTAA

401

 GCATATAGTA    AAGACTTTGA    AACTCTCAAA    GTTGATTTTC    TTAGCAAGCT

 CGTATATCAT    TTCTGAAACT    TTGAGAGTTT    CAACTAAAAG    AATCGTTCGA

451

 ACCTGAAATG    CTGAAAATGT    TCGAAGATCG    TTTATGTCAT    AAAACATATT

 TGGACTTTAC    GACTTTTACA    AGCTTCTAGC    AAATACAGTA    TTTTGTATAA

501

 TAAATGGTGA    TCATGTAACC    CATCCTGACT    TCATGTTGTA    TGACGCTCTT

 ATTTACCACT    AGTACATTGG    GTAGGACTGA    AGTACAACAT    ACTGCGAGAA

551

 GATGTTGTTT    TATACATGGA    CCCAATGTGC    CTGGATGCGT    TCCCAAAATT

 CTACAACAAA    ATATGTACCT    GGGTTACACG    GACCTACGCA    AGGGTTTTAA

601

 AGTTTGTTTT    AAAAAACGTA    TTGAAGCTAT    CCCACAAATT    GATAAGTACT

 TCAAACAAAA    TTTTTTGCAT    AACTTCGATA    GGGTGTTTAA    CTATTCATGA

651

 TGAAATCCAG    CAAGTATATA    GCATGGCCTT    TGCAGGGCTG    GCAAGCCACG

 ACTTTAGGTC    GTTCATATAT    CGTACCGGAA    ACGTCCCGAC    CGTTCGGTGC

BamHIEcoRISacIAscI

701

 TTTGGTGGTG    GCGACCATCC    TCCAAAACAG    GATCCGAATT    CGAGCTCGGC

 AAACCACCAC    CGCTGGTAGG    AGGTTTTGTC    CTAGGCTTAA    GCTCGAGCCG

NotI

PstISalIHindIII

751

 GCGCCTGCAG    GTCGACAAGC    TTGCGGCCGC    ATAATGCTTA    AGTCGAACAG

 CGCGGACGTC    CAGCTGTTCG    AACGCCGGCG    TATTACGAAT    TCAGCTTGTC

T7 promoter2

801

 AAAGTAATCG    TATTGTACAC    GGCCGCATAA    TCGAAATTAA    TACGACTCAC

 TTTCATTAGC    ATAACATGTG    CCGGCGTATT    AGCTTTAATT    ATGCTGAGTG

T7  transcription-2→

 

Lac  operator

851

 TATAGGGGAA    TTGTGAGCGG    ATAACAATTC    CCCATCTTAG    TATATTAGTT

 ATATCCCCTT    AACACTCGCC    TATTGTTAAG    GGGTAGAATC    ATATAATCAA

rbsNdeIBglIIMunIEcoRVFseI

901

 AAGTATAAGA    AGGAGATATA    CATATGGCAG    ATCTCAATTG    GATATCGGCC

 TTCATATTCT    TCCTCTATAT    GTATACCGTC    TAGAGTTAAC    CTATAGCCGG

AatIIKpnI XhoI

951

 GGCCACGCGA    TCGCTGACGT    CGGTACCCTC    GAGTCTGGTA    AAGAAACCGC

 CCGGTGCGCT    AGCGACTGCA    GCCATGGGAG    CTCAGACCAT    TTCTTTGGCG

      pET-Dual-N-GST中沒(méi)有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pET-Dual-N-GST)包括：

AgeI

AleI

BbvCI

BmgBI

BmtI

BseRI

BsiWI

BsmI

Bsu36I

CspCI

NheI

NruI

NsiI

PmeI

PmlI

PspAI

RsrII

SacII

SexAI

SfiI

SmaI

SnaBI

SpeI

SrfI

StuI

TspMI

XmaI

      pET-Dual-N-GST中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pET-Dual-N-GST once)包括：

XbaI

T`CTAG,A

30

AvaI

C`YCGR,G

978

NcoI

C`CATG,G

69

PaeR7I

C`TCGA,G

978

MscI

TGG|CCA

281

XhoI

C`TCGA,G

978

BstBI

TT`CG,AA

471

AvrII

C`CTAG,G

1057

SwaI

ATTT|AAAT

501

BlpI

GC`TNA,GC

1075

BamHI

G`GATC,C

730

DraIII

CAC,NNN`GTG

1404

EcoRI

G`AATT,C

736

PsiI

TTA|TAA

1528

Eco53kI

GAG|CTC

744

SspI

AAT|ATT

1608

SacI

G,AGCT`C

742

AhdI

GACNN,N`NNGTC

1812

BfuAI

ACCTGCNNNN`NNNN,

748

BsaI

GGTCTCN`NNNN,

1874

BspMI

ACCTGCNNNN`NNNN,

748

BglI

GCCN,NNN`NGGC

1930

AscI

GG`CGCG,CC

749

FspI

TGC|GCA

2035

PstI

C,TGCA`G

755

AlwNI

CAG,NNN`CTG

3006

SalI

G`TCGA,C

761

BstZ17I

GTA|TAC

3651

HindIII

A`AGCT,T

767

Tth111I

GACN`N,NGTC

3676

NotI

GC`GGCC,GC

774

PflFI

GACN`N,NGTC

3676

AflII

C`TTAA,G

787

Bpu10I

CC`TNA,GC

4313

BsrGI

T`GTAC,A

814

PpuMI

RG`GWC,CY

4413

NdeI

CA`TA,TG

922

HpaI

GTT|AAC

4780

BglII

A`GATC,T

929

PspoMI

G`GGCC,C

5075

MunI

C`AATT,G

935

ApaI

G,GGCC`C

5075

EcoRV

GAT|ATC

943

BstEII

G`GTNAC,C

5100

FseI

GG,CCGG`CC

948

MluI

A`CGCG,T

5282

AsiSI

GCG,AT`CGC

959

BstAPI

GCAN,NNN`NTGC

5603

ZraI

GAC|GTC

968

SphI

G,CATG`C

5811

AatII

G,ACGT`C

966

SgrAI

CR`CCGG,YG

5963

Acc65I

G`GTAC,C

972

BspDI

AT`CG,AT

6007

KpnI

G,GTAC`C

972

ClaI

AT`CG,AT

6007

PspXI

VC`TCGA,GB

978

      pET-Dual-N-GST質(zhì)粒中推薦使用的測(cè)序引物序列如下：
      MCS1-N Primer (626-647): 5′-GCTATCCCACAAATTGATAAGT-3′
      MCS1-C Primer (832-813): 5′-GATTATGCGGCCGTGTACAA-3′ 
      MCS2-N Primer (813-832): 5′-TTGTACACGGCCGCATAATC-3′
      T7 terminator Primer (1072-1090): 5′-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′ 
      pET-Dual-N-GST的全序列信息：XY2931 pET-Dual-N-GST.txt。
包裝清單：

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱(chēng)

包裝

XY2931

pET-Dual-N-GST

1μg

—

說(shuō)明書(shū)

1份

保存條件：
      -20℃保存。
注意事項(xiàng)：
      本質(zhì)粒未經(jīng)書(shū)面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個(gè)人或單位。
      本產(chǎn)品**于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或**，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的**和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

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