pCMV-N-DsRed (紅色熒光蛋白)
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
產(chǎn)品包裝
產(chǎn)品價(jià)格
XY2705
1μg
888.00元
pCMV-N-DsRed是自行研發(fā)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)質(zhì)粒，用于表達(dá)N端含DsRed (Discosoma sp. red fluorescent protein，香菇珊瑚紅色熒光蛋白)標(biāo)簽的融合蛋白。該質(zhì)粒含有CMV啟動(dòng)子，可以高效啟動(dòng)目的蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)。在多克隆位點(diǎn)的前面有一個(gè)DsRed的完整編碼序列，并且在DsRed前面加入Kozak序列，因此在多克隆位點(diǎn)根據(jù)閱讀框插入目的基因就可以表達(dá)N端含有DsRed標(biāo)簽的融合蛋白。利用DsRed的熒光特性可以比較容易地觀察融合蛋白的表達(dá)水平和細(xì)胞內(nèi)定位，也可以利用DsRed抗體來(lái)檢測(cè)或**沉淀融合蛋白。DsRed與GFP沒有序列同源性，不能使用GFP抗體檢測(cè)DsRed。該質(zhì)粒為卡那霉素抗性。轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，可使用G418篩選穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株。 pCMV-N-DsRed質(zhì)粒的主要信息如下：
Feature Nucleotide
Position
CMV promoter
1-602
T3 promoter and T3 primer binding site
620-639
Kozak sepuence
656-662
DsRed
663-1337
Multiple cloning site
1338-1403
T7 promoter and T7 primer binding site
1446-1468
SV40 polyA signal
1481-1863
f1 origin of ss-DNA replication
2001-2307
bla promoter
2332-2451
SV40 promoter
2476-2814
Neomycin/kanamycin resistance ORF
2849-3641
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal
3642-4099
pUC origin
4226-4892
pCMV-N-DsRed質(zhì)粒(4947bp)的圖譜如下：
pCMV-N-DsRed的多克隆位點(diǎn)的詳細(xì)圖譜如下：
SacI Kozak DsRedM
651
GAGCTCGCCA
CC
ATGGACAA
CACCGAGGAC
GTCATCAAGG
AGTTCATGCA
CTCGAGCGGT
GG
TACCTGTT
GTGGCTCCTG
CAGTAGTTCC
TCAAGTACGT
701
GTTCAAGGTG
CGCATGGAGG
GCTCCGTGAA
CGGCCACTAC
TTCGAGATCG
CAAGTTCCAC
GCGTACCTCC
CGAGGCACTT
GCCGGTGATG
AAGCTCTAGC
751
AGGGCGAGGG
CGAGGGCAAG
CCCTACGAGG
GCACCCAGAC
CGCCAAGCTG
TCCCGCTCCC
GCTCCCGTTC
GGGATGCTCC
CGTGGGTCTG
GCGGTTCGAC
801
CAGGTGACCA
AGGGCGGCCC
CCTGCCCTTC
GCCTGGGACA
TCCTGTCCCC
GTCCACTGGT
TCCCGCCGGG
GGACGGGAAG
CGGACCCTGT
AGGACAGGGG
851
CCAGTTCCAG
TACGGCTCCA
AGGCCTACGT
GAAGCACCCC
GCCGACATCC
GGTCAAGGTC
ATGCCGAGGT
TCCGGATGCA
CTTCGTGGGG
CGGCTGTAGG
901
CCGACTACAT
GAAGCTGTCC
TTCCCCGAGG
GCTTCACCTG
GGAGCGCTCC
GGCTGATGTA
CTTCGACAGG
AAGGGGCTCC
CGAAGTGGAC
CCTCGCGAGG
951
ATGAACTTCG
AGGACGGCGG
CGTGGTGGAG
GTGCAGCAGG
ACTCCTCCCT
TACTTGAAGC
TCCTGCCGCC
GCACCACCTC
CACGTCGTCC
TGAGGAGGGA
1001
GCAGGACGGC
ACCTTCATCT
ACAAGGTGAA
GTTCAAGGGC
GTGAACTTCC
CGTCCTGCCG
TGGAAGTAGA
TGTTCCACTT
CAAGTTCCCG
CACTTGAAGG
1051
CCGCCGACGG
CCCCGTAATG
CAGAAGAAGA
CTGCCGGCTG
GGAGCCCTCC
GGCGGCTGCC
GGGGCATTAC
GTCTTCTTCT
GACGGCCGAC
CCTCGGGAGG
1101
ACCGAGAAGC
TGTACCCCCA
GGACGGCGTG
CTGAAGGGCG
AGATCTCCCA
TGGCTCTTCG
ACATGGGGGT
CCTGCCGCAC
GACTTCCCGC
TCTAGAGGGT
1151
CGCCCTGAAG
CTGAAGGACG
GCGGCCACTA
CACCTGCGAC
TTCAAGACCG
GCGGGACTTC
GACTTCCTGC
CGCCGGTGAT
GTGGACGCTG
AAGTTCTGGC
1201
TGTACAAGGC
CAAGAAGCCC
GTGCAGCTGC
CCGGCAACCA
CTACGTGGAC
ACATGTTCCG
GTTCTTCGGG
CACGTCGACG
GGCCGTTGGT
GATGCACCTG
1251
TCCAAGCTGG
ACATCACCAA
CCACAACGAG
GACTACACCG
TGGTGGAGCA
AGGTTCGACC
TGTAGTGGTT
GGTGTTGCTC
CTGATGTGGC
ACCACCTCGT
BamHI HindIII
1301
GTACGAGCAC
GCCGAGGCCC
GCCACTCCGG
CTCCCAG
GGA
TCCAAGCTTC
CATGCTCGTG
CGGCTCCGGG
CGGTGAGGCC
GAGGGTC
CCT
AGGTTCGAAG
EcoRI EcoRV SalI XhoI XbaI SpeI ApaI
1351
TGCAGGAATT
CGATATCGTC
GACAGATCTC
TCGAGTCTAG
AACTAGTGGG
ACGTCCTTAA
GCTATAGCAG
CTGTCTAGAG
AGCTCAGATC
TTGATCACCC
pCMV-N-DsRed中???有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-DsRed)包括：
AclI
AflII
AgeI
AscI
AsiSI
BaeI
BcgI
BlpI
BmgBI
Bpu10I
BsiWI
BsmBI
BspQI
BssHII
BstXI
BstZ17I
EarI
EcoNI
NruI
PmeI
PmlI
PpuMI
PshAI
PspXI
SapI
ScaI
SgrAI
SmaI
SrfI
SwaI
XcmI
XmaI
XmnI
pCMV-N-DsRed中的單酶切位點(diǎn)（Restriction enzymes that cut pCMV-N-DsRed once）包括：
NdeI
CA`TA,TG
240
PspOMI
G`GGCC,C
1398
SnaBI
TAC|GTA
346
ApaI
G,GGCC`C
CspCI
,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN`
380
PvuI
CG,AT`CG
1478
NheI
G`CTAG,C
597
BclI
T`GATC,A
1634
BmtI
G,CTAG`C
MfeI
`AATT,G
1727
SacI
G,AGCT`C
HpaI
GTT|AAC
1740
Eco53kI
GAG|CTC
653
BtsI
GCAGTG,NN`
1814
BstEII
G`GTNAC,C
803
MluI
A`CGCG,T
1863
AhdI
GACNN,N`NNGTC
841
SfiI
GGCCN,NNN`NGGCC
2749
AfeI
AGC|GCT
945
ClaI
AT`CG,AT
2873
SbfI
CC,TGCA`GG
999
BspDI
BbsI
GAAGACNN`NNNN,
1083
EagI
C`GGCC,G
2939
BsrGI
T`GTAC,A
KasI
G`GCGC,C
3032
PflMI
CCAN,NNN`NTGG
1241
PluTI
G,GCGC`C
AleI
CACNN|NNGTG
1290
NarI
GG`CG,CC
3033
BamHI
G`GATC,C
1338
SfoI
GGC|GCC
3034
HindIII
A`AGCT,T
1344
MscI
TGG|CCA
3115
EcoRI
G`AATT,C
1356
PflFI
GACN`N,NGTC
3151
EcoRV
GAT|ATC
1364
Tth111I
SalI
G`TCGA,C
1368
BsrDI
GCAATG,NN`
3264
AccI
GT`MK,AC
1369
RsrII
CG`GWC,CG
3549
PaeR7I
C`TCGA,G
1380
BstBI
TT`CG,AA
3715
XhoI
BsaI
GGTCTCN`NNNN,
4022
XbaI
T`CTAG,A
1386
ApaLI
G`TGCA,C
4637
SpeI
A`CTAG,T
1392
PciI
A`CATG,T
4951
pCMV-N-DsRed質(zhì)粒中推薦使用的測(cè)序引物序列如下： N-DsRed primer (1284-1303): 5′- TACACCGTGGTGGAGCAGTA -3′ T7 primer (1447-1468): 5′- GTAATACGACTCACTATAGGGC -3′ pCMV-N-DsRed的全序列信息：XY2705 pCMV-N-DsRed-seq.txt pCMV-N-DsRed質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后的表達(dá)效果請(qǐng)參考圖1。
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