pGL6-miR (報告基因質(zhì)粒)
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產(chǎn)品編號
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產(chǎn)品名稱
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產(chǎn)品包裝
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產(chǎn)品價格
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XY2106
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pGL6-miR (報告基因質(zhì)粒)
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1μg
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888.00元
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pGL6-miR
(報告基因質(zhì)粒)是自行研發(fā)的一種用于microRNA(miRNA)等研究的螢光素酶報告基因質(zhì)粒。該質(zhì)?？捎糜诎涯康幕虻?span>3'
非翻譯區(qū)
(3'-untranslated region, 3'-UTR)或其它適當(dāng)序列插入到其多克隆位點(diǎn)，然后在哺乳動物細(xì)胞中高靈敏度地檢測特定
microRNA(miRNA)或其它非編碼
RNA等對該基因
3'-UTR或其它靶序列調(diào)控活性的報告基因質(zhì)粒。
螢光素、螢光素酶、螢火蟲螢光素酶和海腎螢光素酶也經(jīng)常被稱作熒光素、熒光素酶、螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶。
pGL6-miR以的
pGL6質(zhì)粒為模板，具有氨芐青霉素抗性，并在螢火蟲螢光素酶基因之后添加了多克隆位點(diǎn)，便于插入目的基因的
3'-UTR或其它適當(dāng)?shù)陌行蛄小?span>
pGL6-miR的主要工作原理是，把目的基因的
3'非翻譯區(qū)
(3'-untranslated region, 3'-UTR)或其它適當(dāng)序列插入到螢光素酶基因
(luc2)的下游，轉(zhuǎn)染細(xì)胞并檢測螢光素酶的表達(dá)。如果細(xì)胞內(nèi)源或外源表達(dá)的
miRNA與靶序列結(jié)合，通常會抑制螢光素酶的翻譯或促進(jìn)
mRNA的降解，從而使螢光素酶的表達(dá)量減少。因此通過本報告基因質(zhì)粒檢測螢光素酶的表達(dá)水平，可以檢測內(nèi)源或外源表達(dá)的
miRNA是否對插入的靶序列有調(diào)控作用。并且可以通過靶序列中預(yù)測的
miRNA結(jié)合位點(diǎn)的突變，用于比較突變前后螢光素酶表達(dá)水平的變化。如果預(yù)測的
miRNA位點(diǎn)突變后，
miRNA的調(diào)控作用消失，則基本上說明突變的位點(diǎn)就是
miRNA在靶序列中具體的結(jié)合位點(diǎn)。
pGL6-miR帶有中低等強(qiáng)度的
PGK啟動子，有利于檢測
miRNA等對于螢火蟲螢光素酶表達(dá)水平的下調(diào)作用，即當(dāng)
miRNA的抑制作用較弱時也能檢測到。并且
PGK啟動子可以在人、大鼠、小鼠甚至酵母細(xì)胞中都可以發(fā)揮作用。
pGL6-miR質(zhì)粒的主要信息如下：
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Base
pairs
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6097bp
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Feature
Nucleotide
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Position
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PGK
promoter
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20-538
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luc2
reporter gene
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549-2202
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Multiple
cloning region
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2208-2261
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SV40
late poly（A） sinal
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2268-2512
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SV40
early enhancer/promoter
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2554-2972
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Synthetic
neomycin phosphotransferase(Neor)coding region
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2998-3792
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Synthetic
poly(A) signal
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3817-3865
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Synthetic
Beta-lactamase(Ampr) coding region
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4980-5840
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Synthetic
poly(A) signal/transcriptional pause site
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5945-6097
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pGL6-miR質(zhì)粒圖譜如下：
pGL6-miR質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)的詳細(xì)圖譜如下(請?zhí)貏e注意其中的NheI不是單酶切位點(diǎn))：
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KpnI NheI
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2169
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AGGCCAAGAA
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GGGCGGCAAG
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ATCGCCGTGT
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TCCGGTTCTT
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CCCGCCGTTC
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TAGCGGCACA
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BamHI EcoRV XhoI SacI MluI BglII HindIII
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2220
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GGATCCGATA
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TCCTCGAGGA
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GCTCACGCGT
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AGATCTAAGC
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CCTAGGCTAT
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AGGAGCTCCT
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CGAGTGCGCA
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TCTAGATTCG
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pGL6-miR中沒有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not
cut pGL6-miR)包括：
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Aat II
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Afl II
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Asc I
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Ase I
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Bsa I
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BsaA I
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BsiW I
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BssH II
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Eco72 I
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EcoR I
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Nde I
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Nru I
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PflM I
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Pme I
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Pml I
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Psp1406 I
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PspA I
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Rsr II
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Sam I
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SnaB I
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Spl I
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Srf I
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Tth111 I
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Vsp I
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Xcm I
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pGL6-miR中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut
pGL6-miR once)包括：
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Sfi I
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GGCCN,NNN`NGGCC
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9
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Sal I
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G`TCGA,C
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3881
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BspM II
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T`CCGG,A
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445
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EcoN I
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CCTNN`N,NNAGG
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3472
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BsaB I
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GATNN|NNATC
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997
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Xba I
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T`CTAG,A
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3796
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BsrG I
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T`GTAC,A
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1040
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BsiC I
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TT`CG,AA
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3867
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Dra III
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CAC,NNN`GTG
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1696
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BstB I
|
TT`CG,AA
|
3867
|
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Acc65 I
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G`GTAC,C
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2209
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ApaL I
|
G`TGCA,C
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4445
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Asp718
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G`GTAC,C
|
2209
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Ple I
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GAGTC 9/10
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4510
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Kpn I
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G,GTAC`C
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2213
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HgiE II
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ACCNNNNNNGGT -1/13
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4710
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BamH I
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G`GATC,C
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2221
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Not I
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GC`GGCC,GC
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4951
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EcoR V
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GAT|ATC
|
2229
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BstX I
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CCAN,NNNN`NTGG
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4975
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PaeR7 I
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C`TCGA,G
|
2233
|
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Pst I
|
C,TGCA`G
|
4975
|
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Xho I
|
C`TCGA,G
|
2233
|
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BstE II
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G`GTNAC,C
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4978
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Sac I
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G,AGCT`C
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243
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Ahd I
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GACNN,N`NNGTC
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5053
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Mlu I
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A`CGCG,T
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2245
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Bsu36 I
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CC`TNA,GG
|
5409
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Bgl II
|
A`GATC,T
|
2251
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Pvu I
|
CG,AT`CG
|
5423
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HinD III
|
A`AGCT,T
|
2257
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Sac II
|
CC,GC`GG
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5447
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Apo I
|
R`AATT,Y
|
2361
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Bst1107 I
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GTA|TAC
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5563
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Mun I
|
C`AATT,G
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2425
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Xca I
|
GTA|TAC
|
5563
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pGL6-miR質(zhì)粒中推薦使用的測序引物序列如下：
Forward primer (2135-2154): 5′GTTGGACGCCCGCAAGATCC 3′
Reverse primer (2303-2322): 5′GGTTTGTCCAAACTCATCAA 3′
pGL6-miR的全序列信息：XY2106
pGL6-miR-seq.txt
包裝清單：
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產(chǎn)品編號
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產(chǎn)品名稱
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包裝
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XY2106
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pGL6-miR (報告基因質(zhì)粒)
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1μg
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—
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說明書
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1份
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保存條件：
-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
本質(zhì)粒未經(jīng)書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個人或單位。
本產(chǎn)品**于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或**，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的**和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
- 溫馨提示：為規(guī)避購買風(fēng)險，建議您在購買前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)與產(chǎn)品質(zhì)量。
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