pUCm-T載體
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XY2006
20次
253.00元
pUCm-T載體(pUCm-T Vector)是用于克隆含有A末端PCR產(chǎn)物的理想載體?？梢酝ㄟ^藍白斑篩選有插入片段的重組克隆。 很多DNA聚合酶在進行PCR擴增時會在PCR產(chǎn)物雙鏈DNA每條鏈的3'端加上一個突出的堿基A。pUCm-T載體是一種已經(jīng)線性化的載體，載體每條鏈的3'端帶有一個突出的T。這樣，pUCm-T載體的兩端就可以和PCR產(chǎn)物的兩端進行正確的AT配對，在連接酶的催化下，就可以把PCR產(chǎn)物連接到pUCm-T載體中，形成含有目的片段的重組載體。
pUCm-T載體的主要信息如下:
Base pairs
2773
Lac Z promoter
142-171
M13/pUC Sequencing Primer
204-221
Lac Z
222-534
Multiple cloning region
233-376
M13/pUC Reverse Primer
378-395
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region
972-1832
ColE1 origin of replication(rep)
1987-2606
pUCm-T載體的圖譜如圖1：
pUCm-T載體的多克隆位點的詳細序列如下(請?zhí)貏e注意其中的Pst I不是單酶切位點)：
201
ACACAGGAAA
CAGCTATGAC
CATGATTACG
CCAAGCTTGC
ATGCCTGCAG
TGTGTCCTTT
GTCGATACTG
GTACTAATGC
GGTTCGAACG
TACGGACGTC
Xba I Xho I BamH I Bgl II
251
GTCGACTCTA
GACTCGAGGG
ATCCAGATCT
CCAGTCTT GA
CCTGGTCTGC
CAGCTGAGAT
CTGAGCTCCC
TAGGTCTAGA
GGTCAGA TCT
GGACCAGACG
Pst I Not I Nco I EcoR V Cla I Nde I T7 promoter
301
AGGCGGCCGC
CCATGGGATA
TCATCGATCA
TATGTCGC
CC
TATAGTGAGT
TCCGCCGGCG
GGTACCCTAT
AGTAGCTAGT
ATACAGCG
GG
ATATCACTCA
Kpn I Sac I EcoR I
351
CGTATTACGG
TACCGAGCTC
GAATTCACTG
GCCGTCGTTT
TACAACGTCG
GCATAATGCC
ATGGCTCGAG
CTTAAGTGAC
CGGCAGCAAA
ATGTTGCAGC
pUCm-T載體中沒有的酶切位點(Restriction enzymes that do not cut pUCm-T)包括：
Afl II
Age I
Apa I
Asc I
Avr II
Bbs I
Bbv II
Bcl I
Blp I
BsaA I
BseR I
Bsg I
BsiC I
BsiW I
Bsm I
BsmF I
Bsp120 I
BspM II
BsrG I
BssH II
Bst1107 I
BstB I
BstE II
BstX I
Bsu36 I
Dra III
Eco47 III
Eco72 I
Esp I
Fse I
Hpa I
Mlu I
Msc I
Mun I
Nae I
NgoM I
Nhe I
Nru I
Nsi I
PflM I
Pme I
Pml I
PpuM I
PspA I
Rsr II
Sac II
Sfi I
Sma I
SnaB I
Spe I
Spl I
Srf I
Stu I
Xca I
Xma I
pUCm-T載體中的單酶切位點(Restriction enzymes that cut pUCm-T once)包括：
HinD III
A`AGCT,T
234
Acc65 I
G`GTAC,C
360
BspM I
ACCTGC 10/14
239
Asp718
Sph I
G,CATG`C
244
Kpn I
G,GTAC`C
364
Sal I
G`TCGA,C
252
Ban II
G,RGCY`C
370
Acc I
GT`MK,AC
253
Sac I
G,AGCT`C
HinC II
GTY|RAC
254
Apo I
R`AATT,Y
372
Hind II
EcoR I
G`AATT,C
Xba I
T`CTAG,A
258
Kas I
G`GCGC,C
533
Ava I
C`YCGR,G
264
Nar I
GG`CG,CC
534
PaeR7 I
C`TCGA,G
Ehe I
GGC|GCC
535
Xho I
Bbe I
G,GCGC`C
537
BamH I
G`GATC,C
270
EcoO109 I
RG`GNC,CY
780
BsaB I
GATNN|NNATC
275
Aat II
G,ACGT`C
841
Bgl II
A`GATC,T
276
Ssp I
AAT|ATT
955
Xcm I
CCANNNN,N`NNNNTGG
289
Xmn I
GAANN|NNTTC
1160
Tth111 I
GACN`N,NGTC
293
Bsp1286 I
G,DGCH`C
1177
Not I
GC`GGCC,GC
305
Sca I
AGT|ACT
1279
Eag I
C`GGCC,G
EcoN I
CCTNN`N,NNAGG
1399
Xma III
Cfr10 I
R`CCGG,Y
1675
Dsa I
C`CRYG,G
312
Bsa I
GGTCTC 7/11
1694
Nco I
C`CATG,G
Ahd I
GACNN,N`NNGTC
1760
Sty I
C`CWWG,G
AlwN I
CAG,NNN`CTG
2239
EcoR V
GAT|ATC
320
Afl III
A`CRYG,T
2648
Cla I
AT`CG,AT
325
Sap I
GCTCTTC 8/11
2765
pUCm-T載體的全序列信息： XY2006 pUCm-T vector-seq.txt pUCm-T載體是在pUC19載體的基礎(chǔ)上改造而成，除多克隆位點外，其余序列同pUC19(GenBank Accession Number M77789)。 少量自連的載體轉(zhuǎn)化得到的克隆由于編碼了LacZ基因，而在IPTG/X-Gal平板上呈現(xiàn)藍色。大部分重組的載體，由于插入片段破壞了LacZ基因，因而在IPTG/X-Gal平板上轉(zhuǎn)化得到白色克隆。這樣就可以通過藍白斑非常容易地篩選出重組克隆，藍白斑篩選結(jié)果示意圖如圖2。
圖2. pUCm-T載體的藍白斑篩選結(jié)果示意圖。pUCm-T載體和PCR產(chǎn)物片段進行連接，轉(zhuǎn)化后在IPTG/X-Gal平板的上長出的克隆，其中白色克隆代表PCR產(chǎn)物片段可能插入到pUCm-T載體中，但后續(xù)還需要酶切、PCR或者測序確認。
對于重組的質(zhì)粒可以使用載體多克隆位點上的兩個PstI酶切位點進行PstI單酶切鑒定，也可以使用廉價且高效的EcoRI、 BamHI、XbaI、HindIII等內(nèi)切酶進行雙酶切鑒定。 構(gòu)建完成的質(zhì)?？梢酝ㄟ^質(zhì)粒上的正反兩個M13引物位點進行測序或通過T7 promoter上的T7引物位點進行測序。 構(gòu)建完成的質(zhì)?？梢岳?span>T7 RNA polymerase promoter
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20μl
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說明書
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保存條件： -20℃保存。 注意事項： 本質(zhì)粒未經(jīng)碧云天書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實驗室外的任何個人或單位。 DNA聚合酶是否可以在PCR產(chǎn)物3'端加A需參考該DNA聚合酶的說明。對于PCR產(chǎn)物為平端的情況，不適合用于T載體的連接反應。對于平端的PCR產(chǎn)物可以先進行在3'端加A的反應，再用T載體進行克隆。 進行PCR產(chǎn)物克隆時需自備連接、轉(zhuǎn)化等相關(guān)試劑、試劑盒。 本產(chǎn)品**于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或**，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。 為了您的**和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。