一、ELISA試劑盒操作規(guī)范

1. 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

?試劑檢查?：確認(rèn)試劑盒種屬、成分及包裝完整性，檢查運(yùn)輸溫度是否符合要求。

?試劑復(fù)溫?：所有試劑需恢復(fù)至室溫(20-25℃)使用，復(fù)溫時(shí)間約1.5-2小時(shí)。

?儀器校準(zhǔn)?：移液槍需定期校正，酶標(biāo)儀應(yīng)預(yù)熱并設(shè)置好檢測程序。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品配制

標(biāo)準(zhǔn)品加入1ml稀釋液靜置10分鐘后混勻，進(jìn)行7管等倍稀釋(第8管為空白對(duì)照）。

建議從低濃度開始分注，20分鐘內(nèi)完成整板加樣。

3. 檢測流程

?樣本孵育?：每孔加入100μl標(biāo)準(zhǔn)品/樣本，37℃避光孵育90分鐘。

?洗滌步驟?：倒出液體后，每孔加入350μl洗滌液浸泡30秒，重復(fù)3次。

?抗體反應(yīng)?：加入檢測試劑A(100μl/孔)，37℃孵育60分鐘。

?酶標(biāo)反應(yīng)?：加入檢測試劑B(100μl/孔)，37℃孵育30分鐘。

?顯色終止?：加入底物溶液避光孵育10-20分鐘，立即加入終止液測定OD值。

二、生化試劑盒操作要點(diǎn)

1.試劑準(zhǔn)備

液體試劑直接使用，粉劑需按說明書復(fù)溶后分裝保存?。

注意試劑保存條件，避免反復(fù)凍融影響活性。

2.檢測流程

?樣本處理?：根據(jù)樣本類型進(jìn)行離心、稀釋等預(yù)處理。

?反應(yīng)體系?：按比例混合樣本與試劑，注意反應(yīng)時(shí)間控制。

?信號(hào)檢測?：使用分光光度計(jì)在特定波長下測定吸光度。

?結(jié)果計(jì)算?：通過標(biāo)準(zhǔn)曲線或公式計(jì)算目標(biāo)物濃度。

三、關(guān)鍵注意事項(xiàng)

1.共同注意事項(xiàng)

避免樣本蒸發(fā)：反應(yīng)板應(yīng)加蓋或覆膜，置于濕盒中。

嚴(yán)格計(jì)時(shí)：各步驟孵育時(shí)間需**控制。

洗滌徹底：確保每孔液體加滿，拍干時(shí)避免殘留。

2.ELISA特殊要點(diǎn)

加樣順序：建議從低濃度標(biāo)準(zhǔn)品開始連續(xù)加樣。

顯色控制：終止后應(yīng)立即測定，避免顏色變化。

污染預(yù)防：不同批次試劑不可混用，廢棄物需**處理。

3.生化檢測特殊要點(diǎn)

干擾排除：注意溶血、脂血樣本的預(yù)處理。

波長選擇：確保檢測波長與試劑盒要求匹配。

空白校正：每次實(shí)驗(yàn)需設(shè)置試劑空白對(duì)照。

通過規(guī)范操作和嚴(yán)格質(zhì)量控制，可確保兩種試劑盒檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。?