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ELISA試劑盒中酶標抗體有哪些種類?
ELISA試劑盒中的酶標抗體是一種經(jīng)過特殊處理的抗體,它的作用是將mianyi反應(yīng)與酶催化反應(yīng)相結(jié)合,從而實現(xiàn)目標抗原或抗體的高靈敏度檢測。ELISA試劑盒中常用的酶標抗體主要包括:
一、?按標記酶分類
1、辣根過氧化物酶(HRP)標記的抗體:
這是常見的一種酶標記抗體,因其催化活性強、穩(wěn)定性好,廣泛應(yīng)用于各種ELISA檢測。HRP在底物如TMB或OPD作用下能產(chǎn)生明顯的顏色變化,便于肉眼觀察和儀器檢測。
2、堿性磷酸酶(ALP)標記的抗體:
另一種常用的酶標記抗體,ALP同樣具有較高的催化活性,適用于需要更長顯色時間的檢測。ALP與特定底物反應(yīng)**的顏色可能為藍色或紅色,具體取決于所使用的底物類型。
二、?按抗體功能分類?
1、?直接酶標一抗?:直接標記目標抗原的抗體,步驟簡單但靈敏度較低(如檢測植物jisu脫落酸)。
2、?酶標二抗?:用于間接ELISA,通過信號放大提高靈敏度(如檢測植物病原體抗體)。
三、酶標抗體選擇與質(zhì)量控制要點
1、特異性:抗體需針對目標分子特異表位,避免與其他物質(zhì)交叉反應(yīng),如人脂蛋白α試劑盒抗體不與ApoB、ApoA1交叉。
2、標記酶類型:常用HRP(辣根過氧化物酶),配套底物為TMB,終止液多為2mol/L硫酸[[1]]。
3、稀釋與保存:使用封閉液(5%BSA或脫脂奶粉)稀釋至1:1000~1:50000工作濃度,需避光保存、現(xiàn)用現(xiàn)配。
四、注意事項
1、?植物樣本適配性?:需驗證抗體與植物次生代謝物(如多酚、色素)的兼容性。
2、?保存條件?:HRP標記抗體需避光保存,避免反復(fù)凍融導(dǎo)致失活。
這些酶標記抗體的選擇主要取決于實驗的具體要求,包括檢測的靈敏度、顯色時間、所需的信號類型(顏色或熒光)以及是否需要特定的檢測儀器。