氣相色譜儀測定環(huán)己基氨基磺酸鈉含量
1 原理
食品中的環(huán)己基氨基磺酸鈉用水提取,在硫酸介質(zhì)中環(huán)己基氨基磺酸鈉與亞硝酸反應(yīng),生成環(huán)己醇亞硝酸酯,利用氣相色譜儀氫火焰離子化檢測器進(jìn)行分離及分析,保留時(shí)間定性,外標(biāo)法定量。
2 試劑和材料
除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為 GB / T6682 規(guī)定的二級(jí)水。
2. 1 試劑
2. 1. 1 正庚烷 [ CH 3 ( CH 2 ) 5 CH 3 ]。
2. 1. 2 氯化鈉( NaCl )。
2. 1. 3 石油醚:沸程為 30℃~60℃ 。
2. 1. 4 氫氧化鈉( NaOH )。
2. 1. 5 硫酸( H 2 SO 4 )。
2. 1. 6 亞鐵qin化鉀{ K 4 [ Fe ( CN ) 6 ]· 3H 2 O }。
2. 1. 7 硫酸鋅( ZnSO 4 · 7H 2 O )。
2. 1. 8 亞硝酸鈉( NaNO 2 )。
2. 2 試劑配制
2. 2. 1 氫氧化鈉溶液( 40g / L ):稱取 20g 氫氧化鈉,溶于水并稀釋至 500mL ,混勻。
2. 2. 2 硫酸溶液( 200g / L ):量取 54mL 硫酸小心緩緩加入 400mL 水中,后加水至 500mL ,混勻。
2. 2. 3 亞鐵qin化鉀溶液( 150g / L ):稱取折合 15g 亞鐵qin化鉀( 3. 1. 6 ),溶于水稀釋至 100mL ,混勻。
2. 2. 4 硫酸鋅溶液( 300g / L ):稱取折合 30g 硫酸鋅的試劑( 3. 1. 7 ),溶于水并稀釋至 100mL ,混勻。
2. 2. 5 亞硝酸鈉溶液( 50g / L ):稱取 25g 亞硝酸鈉,溶于水并稀釋至 500mL ,混勻。
2. 3 標(biāo)準(zhǔn)品：環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品(C 6 H 12 NSO 3 Na ):純度 ≥99% 。
2. 4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
2. 4. 1 環(huán)己基氨基磺酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液( 5. 00mg / mL ):準(zhǔn)確稱取 0. 5612g 環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品,用水溶解并定容至 100mL ,混勻,此溶液 1.00mL 相當(dāng)于環(huán)己基氨基磺酸 5. 00mg (環(huán)己基氨基磺酸鈉與環(huán)己基氨基磺酸的換算系數(shù)為 0.8909 )。置于 1℃~4℃ 冰箱保存,可保存 12 個(gè)月。
2. 4. 2 環(huán)己基氨基磺酸標(biāo)準(zhǔn)使用液( 1. 00mg / mL ):準(zhǔn)確移取 20. 0mL 環(huán)己基氨基磺酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用水稀釋并定容至 100mL ,混勻。置于 1℃~4℃ 冰箱保存,可保存 6 個(gè)月。
3 儀器與設(shè)備
3. 1 氣相色譜儀:配有氫火焰離子化檢測器( FID )。
3. 2 渦旋混合器。
3. 3 離心機(jī):轉(zhuǎn)速 ≥4000r / min 。
3. 4 超聲波振蕩器。
3. 5 樣品粉碎機(jī)。
3. 6 10 μ L 微量注射器。
3. 7 恒溫水浴鍋。
3. 8 天平:感量 1mg 、 0. 1mg 。
4 分析步驟
4. 1 試樣溶液的制備
4. 1. 1 液體試樣處理
4. 1. 1. 1 普通液體試樣搖勻后稱取 25. 0g 試樣(如需要可過濾),用水定容至 50mL 備用。
4. 1. 1. 2 含二氧化碳的試樣:稱取 25. 0g 試樣于燒杯中, 60℃ 水浴加熱 30min 以除二氧化碳,放冷,用水定容至 50mL 備用。
4. 1. 1. 3 含酒精的試樣:稱取 25. 0g 試樣于燒杯中,用氫氧化鈉溶液( 3. 2. 1 )調(diào)至弱堿性 pH7~8 , 60℃水浴加熱 30min 以除酒精,放冷,用水定容至 50mL 備用。
4. 1. 2 固體、半固體試樣處理
4. 1. 2. 1 低脂、低蛋白樣品(果醬、果凍、水果罐頭、果丹類、蜜餞涼果、濃縮果汁、面包、糕點(diǎn)、餅干、復(fù)合調(diào)味料、帶殼熟制堅(jiān)果和籽類、腌漬的蔬菜等):稱取打碎、混勻的樣品 3.00g~5. 00g 于 50mL 離心管中,加 30mL 水,振搖,超聲提取 20min ,混勻,離心( 3000r / min ) 10min ,過濾,用水分次洗滌殘?jiān)?收集濾液并定容至 50mL ,混勻備用。
4. 1. 2. 2 高蛋白樣品(酸乳、雪糕、冰淇淋等奶制品及豆制品、腐乳等):冰棒、雪糕、冰淇淋等分別放置于250mL 燒杯中,待融化后攪勻稱取;稱取樣品 3. 00g~5. 00g 于 50mL 離心管中,加 30mL 水,超聲提取 20min ,加 2mL 亞鐵qin化鉀溶液,混勻,再加入 2mL 硫酸鋅溶液,混勻,離心( 3000r / min ) 10min ,過濾,用水分次洗滌殘?jiān)?收集濾液并定容至 50mL ,混勻備用。
4. 1. 2. 3 高脂樣品(奶油制品、海魚罐頭、熟肉制品等):稱取打碎、混勻的樣品 3. 00g~5. 00g 于 50mL離心管中,加入 25mL 石油醚,振搖,超聲提取 3min ,再混勻,離心( 1000r / min 以上) 10min ,棄石油醚,再用 25mL 石油醚提取一次,棄石油醚,60℃ 水浴揮發(fā)去除石油醚,殘?jiān)?30mL 水,混勻,超聲提取 20min ,加 2mL 亞鐵qin化鉀溶液,混勻,再加入 2mL 硫酸鋅溶液,混勻,離心( 3000r / min ) 10min ,過濾,用水洗滌殘?jiān)?收集濾液并定容至 50mL ,混勻備用。
4. 1. 3 衍生化準(zhǔn)確移取液體試樣溶液(4. 1. 1 )、固體、半固體試樣溶液( 4. 1. 2 ) 10. 0mL 于 50mL 帶蓋離心管中。離心管置試管架上冰浴中 5min 后,準(zhǔn)確加入 5.00mL 正庚烷,加入 2. 5mL 亞硝酸鈉溶液, 2. 5mL 硫酸溶液,蓋緊離心管蓋,搖勻,在冰浴中放置 30min ,其間振搖 3 次 ~5 次;加入 2.5g 氯化鈉,蓋上蓋后置旋渦混合器上振動(dòng) 1min (或振搖 60 次 ~80 次),低溫離心( 3000r / min ) 10min 分層或低溫靜置20min 至澄清分層后取上清液放置 1℃~4℃ 冰箱冷藏保存以備進(jìn)樣用。
4. 2 標(biāo)準(zhǔn)溶液系列的制備及衍生化
準(zhǔn)確移取 1.00mg/ mL 環(huán)己基氨基磺酸標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.50mL 、 1. 00mL 、 2. 50mL 、 5. 00mL 、 10. 0mL 、25. 0mL 于 50mL 容量瓶中,加水定容。配成標(biāo)準(zhǔn)溶液系列濃度為: 0. 01mg / mL 、 0. 02mg / mL 、 0. 05mg / mL 、0. 10mg / mL 、 0. 20mg / mL 、 0. 50mg / mL 。臨用時(shí)配制以備衍生化用。準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)系列溶液 10.0mL 同( 4. 1. 3 )衍生化。
4. 3 測定
4. 3. 1 色譜條件
4. 3. 1. 1 色譜柱:弱極性石英毛細(xì)管柱(內(nèi)涂 5% 苯基甲基聚硅氧烷, 30m×0. 53mm×1. 0 μ m )或等效柱。
4. 3. 1. 2 柱溫升溫程序:初溫 55℃ 保持 3min , 10℃ / min 升溫至 90℃ 保持 0. 5min , 20℃ / min 升溫至200℃ 保持 3min 。
4. 3. 1. 3 進(jìn)樣口:溫度 230℃ ;進(jìn)樣量 1 μ L ,不分流/分流進(jìn)樣,分流比 1∶5 (分流比及方式可根據(jù)色譜儀器條件調(diào)整)。
4. 3. 1. 4 檢測器:氫火焰離子化檢測器( FID ),溫度 260℃ 。
4. 3. 1. 5 載氣:高純氮?dú)?流量 12. 0mL / min ,尾吹 20mL / min 。
4. 3. 1. 6 氫氣: 30mL / min ;空氣 330mL / min (載氣、氫氣、空氣流量大小可根據(jù)儀器條件進(jìn)行調(diào)整)。
4. 3. 2 色譜分析
分別吸取 1 μ L 經(jīng)衍生化處理的標(biāo)準(zhǔn)系列各濃度溶液上清液( 4.2 ),注入氣相色譜儀中,可測得不同濃度被測物的響應(yīng)值峰面積,以濃度為橫坐標(biāo),以環(huán)己醇亞硝酸酯和環(huán)己醇兩峰面積之和為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。在完全相同的條件下進(jìn)樣 1 μ L 經(jīng)衍生化處理的試樣待測液上清液(4.1. 3 ),保留時(shí)間定性,測得峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣液中的組分濃度;試樣上清液響應(yīng)值若超出線性范圍,應(yīng)用正庚烷稀釋后再進(jìn)樣分析。平行測定次數(shù)不少于兩次。
5 分析結(jié)果的表述
試樣中環(huán)己基氨基磺酸含量按式(1 )計(jì)算:
…………………………( 1 )
式中:
X 1 ———試樣中環(huán)己基氨基磺酸的含量,單位為克每千克( g /kg);
c———由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出定容樣液中環(huán)己基氨基磺酸的濃度,單位為毫克每毫升(mg/ mL );
m ———試樣質(zhì)量,單位為克( g );
V———試樣的*后定容體積 ,單位為毫升( mL )。
計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,結(jié)果保留三位有效數(shù)字
氣相色譜儀測定環(huán)己基氨基磺酸鈉含量
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