高效液相色譜儀測定食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的含量
1 原理
食品中的環(huán)己基氨基磺酸鈉用水提取后,在強酸性溶液中與次氯酸鈉反應(yīng),生成 N , N - 二氯環(huán)己胺,用正庚烷萃取后,利用高效液相色譜儀檢測,保留時間定性,外標法定量。
2 試劑和材料
除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為 GB / T6682 規(guī)定的上等水。
2. 1 試劑
2. 1. 1 正庚烷[ CH 3 ( CH 2 ) 5 CH 3 ]:色譜純。
2. 1. 2 乙腈( CH 3 CN ):色譜純。
2. 1. 3 硫酸( H 2 SO 4 )。
2. 1. 4 次氯酸鈉( NaClO )。
2. 1. 5 碳酸氫鈉( NaHCO 3 )。
2. 1. 6 硫酸鋅( ZnSO 4 · 7H 2 O )。
2. 1. 7 亞鐵qin化鉀{ K 4 [ Fe ( CN ) 6 ]· 3H 2 O }。
2. 1. 8 石油醚:沸程為 30℃~60℃ 。
2. 2 試劑配制
2. 2. 1 硫酸溶液( 1+1 ): 50mL 硫酸小心緩緩加入 50mL 水中,混勻。
2. 2. 2 次氯酸鈉溶液:用次氯酸鈉( 10. 1. 4 )稀釋,保存于棕色瓶中,保持有效氯含量 50g / L 以上,混勻,市售產(chǎn)品需及時標定,臨用時配制。
2. 2. 3 碳酸氫鈉溶液( 50g / L ):稱取 5g 碳酸氫鈉,用水溶解并稀釋至 100mL ,混勻。
2. 2. 4 硫酸鋅溶液( 300g / L ):稱取折合 30g 硫酸鋅( 10. 1. 6 ),溶于水并稀釋至 100mL ,混勻。
2. 2. 5 亞鐵qin化鉀溶液( 150g / L ):稱取折合 15g 亞鐵qin化鉀( 10. 1. 7 ),溶于水并稀釋至 100mL ,混勻。
2. 3 標準品：環(huán)己基氨基磺酸鈉標準品(C 6 H 12 NSO 3 Na ):純度 ≥99% 。
2. 4 標準溶液配制
2. 4. 1 環(huán)己基氨基磺酸標準儲備液( 5. 00mg / mL ):按**法 3. 4. 1 配制。
2. 4. 2 環(huán)己基氨基磺酸標準中間液( 1. 00mg / mL ):按**法 3. 4. 2 配制。
2. 4. 3 環(huán)己基氨基磺酸標準曲線系列工作液:分別吸取標準中間液( 10. 4. 2 ) 0. 50mL 、 1. 0mL 、 2. 5mL 、5. 0mL 、 10. 0mL 至 50mL 容量瓶中,用水定容。該標準系列濃度分別為 10. 0 μ g / mL 、 20. 0 μ g / mL 、50. 0 μ g / mL 、 100 μ g / mL 、 200 μ g / mL 。臨用現(xiàn)配。
3 儀器和設(shè)備
3. 1 高效液相色譜儀,配有紫外檢測器或二極管陣列檢測器。
3. 2 超聲波振蕩器。
3. 3 離心機:轉(zhuǎn)速 ≥4000r / min 。
3. 4 樣品粉碎機。
3. 5 恒溫水浴鍋。
3. 6 天平:感量 1mg 、 0. 1mg 。
4 分析步驟
4. 1 試樣溶液的制備
4. 1. 1 固體類和半固體類試樣處理
稱取均質(zhì)后試樣 5.00g 于 50mL 離心管中,加入 30mL 水,混勻,超聲提取 20min,離心(3000r/ min )20min ,將上清液轉(zhuǎn)出,用水洗滌殘渣并定容至 50mL 備用。含高蛋白類樣品可在超聲提取時加入2. 0mL 硫酸鋅溶液( 10. 2. 4 )和 2. 0mL 亞鐵qin化鉀溶液( 10. 2. 5 )。含高脂質(zhì)類樣品可在提取前先加入25mL 石油醚( 10. 1. 8 )振搖后棄去石油醚層除脂。
4. 1. 2 液體類試樣處理
4. 1. 2. 1 普通液體試樣搖勻后可直接稱取樣品 25. 0g ,用水定容至 50mL 備用(如需要可過濾)。
4. 1. 2. 2 含二氧化碳的試樣:稱取 25. 0g 試樣于燒杯中, 60℃ 水浴加熱 30min 以除二氧化碳,放冷,用水定容至 50mL 備用。
4. 1. 2. 3 含酒精的試樣:稱取 25. 0g 試樣于燒杯中,用氫氧化鈉溶液調(diào)至弱堿性 pH7~8 , 60℃ 水浴加熱 30min 以除酒精,放冷,用水定容至 50mL 備用。
4. 1. 2. 4 含乳類飲料稱取試樣 25. 0g 于 50mL 離心管中,加入 3. 0mL 硫酸鋅溶液( 10. 2. 4 )和 3. 0mL亞鐵qin化鉀溶液(2. 2. 5 ),混勻,離心分層后,將上清液轉(zhuǎn)出,用水洗滌殘渣并定容至 50mL 備用。
4. 1. 3 衍生化
準確移取 10mL 已制備好的試樣溶液(4.1. 1 或 4. 1. 2 ),加入 2. 0mL 硫酸溶液(2. 2. 1 ), 5. 0mL正庚烷(2. 1. 1 ),和 1. 0mL 次氯酸鈉溶液( 2. 2. 2 ),劇烈振蕩 1min ,靜置分層,除去水層后在正庚烷層中加入 25mL 碳酸氫鈉溶液( 2.2. 3 ),振蕩 1min 。靜置取上層有機相經(jīng) 0. 45 μ m 微孔有機相濾膜過濾,濾液備進樣用。
3. 2 儀器參考條件
3. 2. 1 色譜柱: C 18 柱, 5 μ m , 150mm×3. 9mm ( i , d ),或同等性能的色譜柱。
3. 2. 2 流動相:乙腈 + 水( 70+30 )。
3. 2. 3 流速: 0. 8mL / min 。
3. 2. 4 進樣量: 10 μ L 。
3. 2. 5 柱溫: 40℃ 。
3. 2. 6 檢測器:紫外檢測器或二極管陣列檢測器。
3. 2. 7 檢測波長: 314nm 。
3. 3 標準曲線的制作
移取 10mL 環(huán)己基氨基磺酸標準系列工作液(2.4. 3 )按 12. 1. 3 衍生化。取過 0. 45 μ m 微孔有機相濾膜后的溶液 10 μ L 分別注入高效液相色譜儀中,測定相應(yīng)的峰面積,以標準工作溶液的濃度為橫坐標,以環(huán)己基氨基磺酸鈉衍生化產(chǎn)物 N , N - 二氯環(huán)己胺峰面積為縱坐標,繪制標準曲線。
4. 4 樣品的測定
將衍生后試樣溶液(4. 1. 3 ) 10 μ L 注入高效液相色譜儀中,保留時間定性,測得峰面積,根據(jù)標準曲線得到試樣定容溶液中環(huán)己基氨基磺酸的濃度,平行測定次數(shù)不少于兩次。
5 分析結(jié)果的表述
試樣中環(huán)己基氨基磺酸含量按式(2 )計算:
…………………………( 2 )
式中:
X 2———試樣中環(huán)己基氨基磺酸的含量,單位為克每千克(g/kg);
c———由標準曲線計算出試樣定容溶液中環(huán)己基氨基磺酸的濃度,單位為微克每毫升(μ g/ mL );
V———試樣的*后定容體積 ,單位為毫升( mL );
m———試樣的質(zhì)量,單位為克(g );
1000 ———由 μ g / g 換算成 g /kg的換算因子。
計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,結(jié)果保留三位有效數(shù)字
高效液相色譜儀測定食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的含量
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