高效液相色譜儀測定食品中合成著色劑含量
1 范圍
本標準規(guī)定了飲料、配制酒、硬糖、蜜餞、淀粉軟糖、巧克力豆及著色糖衣制品中合成著色劑(不含鋁色錠)的測定方法。
本標準適用于飲料、配制酒、硬糖、蜜餞、淀粉軟糖、巧克力豆及著色糖衣制品中合成著色劑(不含鋁色錠)的測定。
2 原理
食品中人工合成著色劑用聚酰胺吸附法或液 - 液分配法提取,制成水溶液,注入高效液相色譜儀,經反相色譜分離,根據保留時間定性和與峰面積比較進行定量。
3 試劑和材料
除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為 GB / T6682 規(guī)定的上等水。
3. 1 試劑
3. 1. 1 甲醇( CH 3 OH ):色譜純。
3. 1. 2 正己烷( C 6 H 14 )。
3. 1. 3 鹽酸( HCl )。
3. 1. 4 冰醋酸( CH 3 COOH )。
3. 1. 5 甲酸( HCOOH )。
3. 1. 6 乙酸銨( CH 3 COONH 4 )。
3. 1. 7 檸檬酸( C 6 H 8 O 7 · H 2 O )。
3. 1. 8 硫酸鈉( Na 2 SO 4 )。
3. 1. 9 正丁醇( C 4 H 10 O )。
3. 1. 10 三正辛胺( C 24 H 51 N )。
3. 1. 11 無水乙醇( CH 3 CH 2 OH )。
3. 1. 12 氨水( NH 3 · H 2 O ):含量 20%~25% 。
3. 1. 13 聚酰胺粉(尼龍 6 ):過 200 μ m (目)篩。
3. 2 試劑配制
3. 2. 1 乙酸銨溶液( 0. 02mol/ L ):稱取 1.54g 乙酸銨,加水至 1000mL ,溶解,經 0.45 μ m 微孔濾膜過濾。
3. 2. 2 氨水溶液:量取氨水 2mL ,加水至 100mL ,混勻。
3. 2. 3 甲醇 - 甲酸溶液( 6+4 ,體積比):量取甲醇 60mL ,甲酸 40mL ,混勻。
3. 2. 4 檸檬酸溶液:稱取 20g 檸檬酸,加水至 100mL ,溶解混勻。
3. 2. 5 無水乙醇 - 氨水 - 水溶液( 7+2+1 ,體積比):量取無水乙醇 70mL 、氨水溶液( 3. 2. 2 ) 20mL 、水10mL ,混勻。
3. 2. 6 三正辛胺 - 正丁醇溶液( 5% ):量取三正辛胺 5mL ,加正丁醇至 100mL ,混勻。
3. 2. 7 飽和硫酸鈉溶液。
3. 2. 8 pH6 的水:水加檸檬酸溶液調pH到 6 。
3. 2. 9 pH4 的水:水加檸檬酸溶液調pH到 4 。
3. 3 標準品
3. 3. 1 檸檬黃( CAS : 1934-21-0 )。
3. 3. 2 新紅( CAS : 220658-76-4 )。
3. 3. 3 莧菜紅( CAS : 915-67-3 )。
3. 3. 4 胭脂紅( CAS : 2611-82-7 )。
3. 3. 5 日落黃( CAS : 2783-94-0 )。
3. 3. 6 亮藍( CAS : 3844-45-9 )。
3. 3. 7 赤蘚紅( CAS : 16423-68-0 )。
3. 4 標準溶液配制
3. 4. 1 合成著色劑標準貯備液( 1mg / mL ):準確稱取按其純度折算為 100% 質量的檸檬黃、日落黃、莧菜紅、胭脂紅、新紅、赤蘚紅、亮藍各 0.1g (準確至 0.0001g ),置 100mL 容量瓶中,加pH6 的水到刻度。配成水溶液(1. 00mg / mL )。
3. 4. 2 合成著色劑標準使用液( 50 μ g / mL ):臨用時將標準貯備液加水稀釋 20 倍,經 0. 45 μ m 微孔濾膜過濾。配成每毫升相當 50.0 μ g 的合成著色劑。
4 儀器和設備
4. 1 高效液相色譜儀,帶二極管陣列或紫外檢測器。
4. 2 天平:感量為 0. 001g 和 0. 0001g 。
4. 3 恒溫水浴鍋。
4. 4 G3 垂融漏斗。
5 分析步驟
5. 1 試樣制備
5. 1. 1 果汁飲料及果汁、果味碳酸飲料等:稱取 20g~40g (準確至 0. 001g ),放入 100mL 燒杯中。含二氧化碳樣品加熱或超聲驅除二氧化碳。
5. 1. 2 配制酒類:稱取 20g~40g (準確至 0. 001g ),放入 100mL 燒杯中,加小碎瓷片數片,加熱驅除乙醇。
5. 1. 3 硬糖、蜜餞類、淀粉軟糖等:稱取 5g~10g (準確至 0. 001g )粉碎樣品,放入 100mL 小燒杯中,加水 30mL ,溫熱溶解,若樣品溶液pH較高,用檸檬酸溶液調pH到 6 左右。
5. 1. 4 巧克力豆及著色糖衣制品:稱取 5g~10g (準確至 0. 001g ),放入 100mL 小燒杯中,用水反復洗滌色素,到巧克力豆無色素為止,合并色素漂洗液為樣品溶液。
5. 2 色素提取
5. 2. 1 聚酰胺吸附法:樣品溶液加檸檬酸溶液調pH到 6 ,加熱至 60℃ ,將 1g 聚酰胺粉加少許水調成粥狀,倒入樣品溶液中,攪拌片刻,以 G3 垂融漏斗抽濾,用 60℃ pH 為 4 的水洗滌 3 次 ~5 次,然后用甲醇 - 甲酸混合溶液洗滌 3 次 ~5 次 (含赤蘚紅的樣品用 5.2. 2 法處理),再用水洗至中性,用乙醇 - 氨水 -水混合溶液解吸 3 次 ~5 次,直至色素完全解吸,收集解吸液,加乙酸中和,蒸發(fā)至近干,加水溶解,定容至 5mL 。經 0.45 μ m 微孔濾膜過濾,進高效液相色譜儀分析。
5. 2. 2 液 - 液分配法(適用于含赤蘚紅的樣品):將制備好的樣品溶液放入分液漏斗中,加 2mL 鹽酸、三正辛胺 - 正丁醇溶液( 5% ) 10mL~20mL ,振搖提取,分取有機相,重復提取,直至有機相無色,合并有機相,用飽和硫酸鈉溶液洗 2 次,每次 10mL ,分取有機相,放蒸發(fā)皿中,水浴加熱濃縮至 10mL ,轉移至分液漏斗中,加 10mL 正己烷,混勻,加氨水溶液提取 2 次 ~3 次,每次 5mL ,合并氨水溶液層(含水溶性酸性色素),用正己烷洗 2 次,氨水層加乙酸調成中性,水浴加熱蒸發(fā)至近干,加水定容至 5mL 。經0. 45 μ m 微孔濾膜過濾,進高效液相色譜儀分析。
5. 3 儀器參考條件
5. 3. 1 色譜柱: C 18 柱, 4. 6mm×250mm , 5 μ m 。
5. 3. 2 進樣量: 10 μ L 。
5. 3. 3 柱溫: 35℃ 。
5. 3. 4 二極管陣列檢測器波長范圍: 400nm~800nm ,或紫外檢測器檢測波長: 254nm 。
5. 3. 5 梯度洗脫表見表 1 。
5. 4 測定
將樣品提取液和合成著色劑標準使用液分別注入高效液相色譜儀,根據保留時間定性,外標峰面積法定量。
6 分析結果的表述
試樣中著色劑含量按式(1 )計算:
…………………………( 1 )
式中:
X ———試樣中著色劑的含量,單位為克每千克( g /kg);
c———進樣液中著色劑的濃度,單位為微克每毫升(μ g/ mL );
V———試樣稀釋總體積,單位為毫升( mL );
m———試樣質量,單位為克(g );
1000 ———換算系數。
高效液相色譜儀測定食品中合成著色劑含量
高效液相色譜儀測定食品中合成著色劑含量
高效液相色譜儀測定食品中合成著色劑含量
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