SILAC
背景簡介:
SILAC( Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)技術(shù)是依據(jù)細(xì)胞生長對必需氨基酸的依賴原理,利用穩(wěn)定同位素標(biāo)記( 13C,15N,2H)的必需氨基酸對細(xì)胞蛋白質(zhì)組進行代謝標(biāo)記的方法;13C,15N,2H是穩(wěn)定同位素,沒有放射性,因此可以在常規(guī)條件下進行試驗。
穩(wěn)定同位素氨基酸”標(biāo)記”;
SILAC“標(biāo)記”了蛋白質(zhì)與“未標(biāo)記”的蛋白質(zhì)(普通培養(yǎng)基培養(yǎng))存在數(shù)目的質(zhì)量差異,該質(zhì)量差異在后續(xù)LC-MS的質(zhì)譜( MSl)中呈現(xiàn)一對同位素質(zhì)譜峰,通過質(zhì)譜峰的信號強度能實現(xiàn)對2組樣品中每一個蛋白質(zhì)表達水平的定量,終能確定蛋白質(zhì)表達水平差異(差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析)和區(qū)分特異性和非特異性相互作用(蛋白質(zhì)相互作用分析);同時通過質(zhì)譜( MS/MS,MS2)實現(xiàn)對樣品中蛋白質(zhì)的鑒定。
檔次。
SILAC氨基酸對照表:
SILAC實驗設(shè)計:
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