細(xì)胞實驗中,培養(yǎng)細(xì)胞一一旦污染,一般情況下,都會比較難處理。如果污染細(xì)胞作用不大,可以不要了;有細(xì)胞株留存的或可購置的,可在找到原因后進行的**操作室,復(fù)蘇或者重新購置細(xì)胞,再進行培養(yǎng)。若污染細(xì)胞作業(yè)很大,又難于重新得到,可以實施以下辦法進行**。
(一)使用***
***對殺滅**較有效。聯(lián)合用藥比單獨用藥效果好。預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好。預(yù)防用藥一般用雙***(青霉素100u/mL加鏈霉素100μg/mL),污染后**用藥需采用大于常用量5~10倍的沖洗法,于加藥后作用24~48小時,再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期可能有效。所用***品種除青霉素、鏈霉素外,還可用慶大霉素、卡那霉素、多粘菌素、四環(huán)素、制霉菌素等。常用400~800μg/mL卡那霉素或200μg/mL四環(huán)素處理,每隔2~3日換液1次,傳1~2代進行**。近年來有報道,4-氟,2-羥基喹啉(Ciprofloxacin,Cip)、截耳素衍生物(Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四環(huán)素衍生物(BM-2)等三種***單用或合用對殺滅支原體有效。這三種***均用PBS配成250X濃縮液,-20℃保存?zhèn)溆?,使用濃度Cip為10μg/mL,BM-1為10μg/mL,BM-2為5μg/mL。使用時先吸除污染的培養(yǎng)液,加入含BM-1的RPMI1640培養(yǎng)液,3天后再吸除培養(yǎng)液,加入含BM-2的RPMI1640培養(yǎng)液,培養(yǎng)4天,如此連續(xù)3個輪次,直至用33258熒光染色鏡檢證明已**支原體后,再加正常培養(yǎng)液培養(yǎng)傳代3-4次。
(二)使用支原體特異性血清
用5%的兔支原體**血清(血凝效價1:320以上)可去除支原體污染,因特異抗體可抑制支原體生長,故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性,并且5個月后仍為陰性。但此法比較麻煩,不如用***方便、經(jīng)濟。
(三)加溫處理
將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時,可殺死支原體,但對細(xì)胞有**影響。所以在處理前要進行預(yù)試驗,摸索能大限度殺死支原體又對細(xì)胞影響小的加熱時間。此法有時不可靠。若先用**處理后,再以41℃加溫處理效果更佳。
(四)其他方法
除了上述去除污染的方法外,還有動物體內(nèi)接種**法、巨噬細(xì)胞吞噬法、污染培養(yǎng)瓶中加溴尿嘧啶再用光照射的方法及過濾法等,但均較麻煩,且效果不確定。所以一旦支原體污染,除非有特別重要價值,一般均棄之重新培養(yǎng)。
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