293T細(xì)胞培養(yǎng)步驟

基爾頓生物科技（上海）有限公司，成立于2005年，改名基爾頓生物科技（上海）有限公司，基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)、生物化學(xué)、病理檢測、基因檢測等技術(shù)在科研中的應(yīng)用和推廣。

293T細(xì)胞由293細(xì)胞派生，同時表達(dá)SV40大T抗原，含有SV40復(fù)制起始點與啟動子區(qū)的質(zhì)?？梢詮?fù)制。

293T細(xì)胞培養(yǎng)過程：

1.將移液器和移液槍、15ml離心管、離心管架、75cm2新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶放于生物**柜中，按照生物**柜的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，將生物**柜的紫外開啟半小時。

2. 將含10%胎牛血清和100U/ml雙抗的DMEM及PBS放于37℃水浴鍋中預(yù)熱。

3.將已長到80%-90%的293T細(xì)胞培養(yǎng)瓶從37℃，5%的CO2培養(yǎng)箱中取出，先用75%的酒精噴灑于瓶表面，將細(xì)胞培養(yǎng)瓶旋轉(zhuǎn)放于生物**柜中，用無菌的移液管吸凈其中的培養(yǎng)基，加5ml的預(yù)熱的PBS洗滌一次，吸凈PBS。

4. 將含EDTA-0.25%tyption用PBS稀釋兩陪到五倍，向該75cm2的細(xì)胞瓶中加入3ml稀釋好的EDTA-0.25%tyption，讓其充分平鋪于細(xì)胞表面。蓋好瓶蓋，將細(xì)胞瓶放在顯微鏡下觀察，直到細(xì)胞變圓，加含10%胎牛血清的DMEM終止反應(yīng)，用移液管輕輕將瓶上的細(xì)胞吹下，將細(xì)胞液移到15ml無菌的離心管中，1000rpm離心3分鐘。

5.將離心上清吸棄掉，用手指輕輕拍打離心管底將底部細(xì)胞分散開，再加3mlDMEM培養(yǎng)基將分散的細(xì)胞重懸稀釋開，取量的細(xì)胞液進行n倍稀釋后計數(shù)，按照細(xì)胞計數(shù)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進行。

6. 計數(shù)好之后細(xì)胞傳代密度按照2~5×104個細(xì)胞/cm2進行傳代培養(yǎng)，每個75cm2的培養(yǎng)瓶中加10mlDMEM培養(yǎng)基，放于37℃，5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

7. 24小時后觀察細(xì)胞狀態(tài)，待細(xì)胞長到80%-90%時進行下一次傳代培養(yǎng)。

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