傳統(tǒng)的2D-LC使用的是離子交換（IEX）和反相（RP）色譜。所有IEX方法都要使用含鹽的緩沖劑，如果緩沖劑進入了質(zhì)譜儀（MS），可能會引起電離背景和污染問題。由于IEX分離僅基于肽類的電荷，IEX維度常常導(dǎo)致較差的色譜分離度，這時肽類會以多種餾分的形式出現(xiàn)，使數(shù)據(jù)解析變得非常困難。
這一改進的2D方法在**維度使用pH為10的RP，然后在**維度使用pH為2的RP，得到了遠(yuǎn)遠(yuǎn)好于傳統(tǒng)IEX方法的結(jié)果。
通過2D-LC分離獲得了越來越多的準(zhǔn)確鑒定結(jié)果。我們可以看到更多基于2D-LC的可重現(xiàn)蛋白質(zhì)鑒定。
當(dāng)**維度使用離子交換作為分離方法時，可能會導(dǎo)致分離度較差和餾分間的流失。在**步使用高分離度技術(shù)支持，可確保在*后一步為您提供更豐富的信息。在pH為10的條件下使用反相色譜，接著在較低pH條件下利用亞2 μm顆粒技術(shù)進行分離，可獲得有用的正交分離結(jié)果，并生成高質(zhì)量的數(shù)據(jù)。
在此分離中，通過分析大腸桿菌的胰蛋白酶消化物證實了2D-LC分離復(fù)雜蛋白質(zhì)組學(xué)樣品的能力。通過在一個維度中使用ACQUITY®UPLC M-Class，在色譜柱上加載0.5 μg樣品進行分離，從而在2874種肽中鑒定出365種蛋白質(zhì)。添加2.5 μg樣品至2D-LC系統(tǒng)，分別通過5步和10步分離鑒定出7661種和9415種肽。
2D-LC可實現(xiàn)：