正相HPLC色譜柱使用注意事項
清洗步驟
1. 每次清洗都用低流速起步，當檢測到柱壓穩(wěn)定在一定水平后再增加流速。
2. 先用10柱體積不含其它添加劑的流動相中的弱溶劑，如正己烷、氯仿等反沖色譜柱。
3. 再用20柱體積的諸如二氯甲烷或異丙醇等流動相中的強溶劑反沖色譜柱。
4. 100%異丙醇的極性和正相洗脫能力足夠把正相柱上的所有殘留物清洗掉。如果異丙醇的清洗還不足以恢復色譜性能，則說明色譜柱柱床有塌陷和空洞了，用清洗的方法無法解決這個問題。色譜癥狀和清洗再生過后的色譜性能恢復情況往往能提供色譜柱真正存在問題的線索。
正相柱除水分
諸如保留時間漂移等選擇性改變的一些色譜癥狀，可以歸因于固定相的變化，而填料可能還是完好的。在正相色譜中，固定相的水分含量常常是個影響選擇性的關(guān)鍵參數(shù)。大部分溶劑都內(nèi)含有小部分的溶解水分(正己烷20攝氏度下水分含量是0.0111% w/w ), 正相色譜柱中水分含量隨時間的不同是導致選擇性變化的*普通的一個因素。
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含2.5 % 二甲氧基丙烷(dimethoxypropane)和2.5 % 冰醋酸的正己烷沖洗色譜柱30個柱體積，可以去除色譜柱中水分并恢復色譜柱原來或所需要的選擇性。
考慮到從流動相和色譜柱中完全去除水分非常困難，還有個尚有爭議的簡單方法可以采用。使用水分含量可控的流動相(譬如和水半飽和)以一直保持*初的方法選擇性，而不需要每次進行冗長的除水分步驟。不管何種情況，*重要的都是保持水分條件的一致性。