2.1 啤酒有害**檢測培養(yǎng)基(NBB)
市面上的NBB培養(yǎng)基有以下三種形式:瓊脂培養(yǎng)基、培養(yǎng)液和濃縮培養(yǎng)液。
NBB中含有的營養(yǎng)和生長物質(zhì),以及添加的特殊促進生長物質(zhì)能夠迅速可靠的檢出啤酒中的所有有害菌。因為,檢測時間取決于許多因素(如微生物含量、**種類、啤酒的適應程度、生理狀況、微生物來源等),所以,當污染較重時,可能只需培養(yǎng)1天即可;反之,當污染僅在痕跡量范圍或微生物生長特別緩慢時,則需要培養(yǎng)數(shù)天。
2.1.1 NBB瓊脂培養(yǎng)基主要用于進行膜過濾,酵母樣可直接在上面劃線,培養(yǎng)基中所含的指示劑氯酸紅會因為有產(chǎn)酸的**而變色。菌落周圍形成一黃色暈圈,若酵母太稠,會由于其自溶產(chǎn)物而防礙指示劑變色。培養(yǎng)時,置于二氧化碳環(huán)境中28℃,培養(yǎng)5天以上。
2.1.2 NBB培養(yǎng)液分裝到無菌試管中。過濾膜可卷成條形插入試管,酵母樣可直接加進去(約0.5mL酵母混入10mL培養(yǎng)液中)。須注意的是,同樣要防止酵母的自溶而干擾培養(yǎng)基的變色。培養(yǎng)時間同樣在5天以上,但不一定要置于二氧化碳環(huán)境中。
2.1.3 NBB濃縮培養(yǎng)液對處理后酵樣比較合適。使用時,先將大約7mL濃縮液加入180mL無菌取樣瓶。接著,進行無菌取樣操作。取樣瓶可能會因為泡沫太多而取不滿樣品,那么,應等泡沫消失完,再在剩余空間用無菌水布滿,以排除氧氣,同時進行稀釋濃縮液,進行充分混勻。
通過在下部沉積的部分沉淀,用顯微鏡就可觀察到**生長繁殖情況(一般,在視野中會出現(xiàn)一個或多個可疑細胞,如果細胞為單個形式,則表明此微生物為死細胞或無害微生物)。
同樣,含酵母的前酵或后酵啤酒可以非常方便地用NBB-C培養(yǎng)基來檢測。當然,渾濁樣品也可以直接采用NBB-B培養(yǎng)基來檢測。利用無菌取樣瓶奪取大約1mL樣品,靜止一段時間使酵母沉降,從下面用無菌吸管或無菌棉簽取大約0.5mL樣品,注入70%的NBB-B培養(yǎng)液,培養(yǎng)過程進行封蓋并保持松開狀態(tài),以方便二氧化碳的溢出。