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Elispot直接間接法
   Elispot可在已包被抗體的孔中直接刺激細胞（直接法），或在24孔板或燒瓶中先刺激細胞，然后放入已包被的孔中（間接法）。使用哪種方法基于：1）檢測細胞的類型；2）希望得到的細胞量。如果細胞生成只需少量的細胞因子，使用直接法；如果細胞生成細胞因子較多，*好使用間接法。其它步驟一致。
   刺激方法：建議用PMA和婁諾霉素刺激PBMC，使其產(chǎn)生IFNγ。
   Elispot在培養(yǎng)液中稀釋PBMC（如：RPMI 1640加2mM谷氨酸鹽和10%加熱失活的小牛血清），其中含1ng/ml PMA和500ng/ml婁諾霉素（Sigma, Saint Louis, MO）。加5X104至3x105個細胞到抗體包被的PVDF孔，孵育箱中孵育10-15小時。其它的刺激劑孵育時間可能不同，基于細胞因子生成細胞的量，按不同情況作*佳選擇。
   試劑的準(zhǔn)備：1. 10ml磷酸緩沖鹽（PBS，10X）以90ml蒸餾水稀釋；2. 0.22g脫脂乳用11ml稀釋的PBS溶解，*終濃度為2%；3. 0.22gBSA溶解于22ml已稀釋的PBS，*終濃度為1%；4. 10ml濃縮洗滌液（200x）以1990ml蒸餾水稀釋；5. 10ul親和素堿性磷酸酶以10ml PBS-1%,BSA稀釋6. 7ml酒精以3ml蒸餾水稀釋，*終濃度為70%。