高效液相層析法是用特制微粒（<10um）充填的層析柱作為固定相，通過高壓使液體流動(dòng)相快速通過層析柱而達(dá)到快速有效分離液相中各種物質(zhì)的層析技術(shù)。它具有分離效果好、分析速度快，檢測(cè)靈敏度高等特點(diǎn)。在醫(yī)藥衛(wèi)生和生物化學(xué)中得到廣泛的應(yīng)用，蛋白質(zhì)、糖類、核酸、氨基酸、生物堿、類固醇和類脂等大分子以及高分子聚合物都能用HPLC測(cè)定。

     典型的高效液相色譜儀包括輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等部分組成。流動(dòng)相用一高壓泵輸入，由于流動(dòng)相液體中常溶有微量氣體，脫去其中氣體是很有必要的。在分離過程中按一定程序連續(xù)改變流動(dòng)相的離子強(qiáng)度、pH和極性，以改變分離條件、提高分離效果、縮短分離時(shí)間，因此，需要兩臺(tái)高壓泵。進(jìn)樣可以是注射器進(jìn)樣，也可以是進(jìn)樣閥進(jìn)樣。HPLC使用的檢測(cè)器不少，但商品化的還不多，應(yīng)用多的是紫外或紫外－可見分光檢測(cè)器，還有熒光檢測(cè)器、示差檢測(cè)器和電化學(xué)檢測(cè)器等。

（一）層析柱方法原理

    1．液固吸附層析法在色譜柱中填充固體吸附劑，待測(cè)組分通過色譜柱時(shí)，不斷地被吸附劑吸附和被流動(dòng)相解吸附。基于不同組分非被吸附和被解吸附的行為差異，從而達(dá)到分離的目的。常用的吸附劑有硅膠、氧化鋁、弗羅里硅土等。

    2．液液分配層析法系在固體填充顆粒上涂上一層薄薄的固定液，待測(cè)組分在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行連續(xù)的分配萃取，由于被分離物質(zhì)在兩相間的分配系數(shù)不同而達(dá)到分離目的。

    3．離子交換層析法在色譜柱中填充離子交換樹脂。帶電離子隨流動(dòng)相經(jīng)色譜柱時(shí)，與帶有異性電荷的樹脂有一定的親和力而得以適當(dāng)保留。由于各種離子與樹脂的親和力不同，其保留行為也不同，從而得以分離。

（二）層析柱臨床應(yīng)用

     高效液相層析法是目前好的血藥濃度監(jiān)測(cè)方法，但在實(shí)際應(yīng)用中還存在一些問題，如每遇到一個(gè)新藥必須摸索測(cè)定的佳條件；各種**的測(cè)定條件不同，要不斷的更換流動(dòng)相甚至色譜柱；每次只能測(cè)定一種**，至多只能測(cè)定一類**，無法測(cè)定性質(zhì)不同的**。因此，高效液相層析法用于常規(guī)血藥濃度監(jiān)測(cè)，只適用于少量常用的某些特定**，大大限制了它的推廣應(yīng)用。鑒于臨床的需要，國外一些公司設(shè)計(jì)了自動(dòng)高效液相色譜儀，該儀器具有如下優(yōu)點(diǎn)：①固定色譜柱和流動(dòng)相，使一臺(tái)儀器適合多種**的檢測(cè)。②利用計(jì)算機(jī)技術(shù)，儲(chǔ)存幾百種**的圖譜，能自動(dòng)識(shí)別未知**。③為提高圖譜鑒別能力，該機(jī)利用了三維光譜、出峰時(shí)間等多種手段。④自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)使儀器自動(dòng)定量或定性測(cè)定，分析多達(dá)50個(gè)樣品。