相對(duì)定量分析方法 ： 2-ΔΔCt 前提：目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴(kuò)增效率接近100％且偏差在5％以內(nèi) 1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標(biāo)基因的CT值： ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test） ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator） 2、用校準(zhǔn)樣本的ΔCT值歸一試驗(yàn)樣本的ΔCT值： ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator） 3、計(jì)算表達(dá)水平比率： 2 –ΔΔCT=表達(dá)量的比值 參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：PCR檢測(cè)試劑盒 貨號(hào)：FS-205642
使用方法:
一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例） 1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽(yáng)性對(duì)照。 2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。 3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。 4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。 5. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。 6. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。 7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
具有下列特點(diǎn)： 1.根據(jù) 指標(biāo)的保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。 2.靈敏度比常規(guī) PCR 高 2-3 個(gè)數(shù)量級(jí)，可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。 3.即開(kāi)即用，用戶只需要提供樣品模板，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速。 4.一管式熒光定量 PCR 檢測(cè)，避免后續(xù)污染。 5.本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。 6.本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。 需要自備的器材： 1．儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 μL、20 μL、200 μL、1000 μL）。 2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水 處理的**離心管、吸頭（10 μL、200 μL、1000 μL）、**雙蒸水。
"50 μl Lyso-Tracker Red（溶酶體紅色熒光探針） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 100 mg MEQ，（6-甲氧-N-乙基） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 50 μg Mito-Tracker Green（線粒體綠色熒光探針） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 1 mg MM4-64（FM®4-64） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 1 mg MM1-43（FM®1-43） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 25 mg Monobromobimane [mBBR] Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 20 mg MQAE（氯離子熒光探針） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 25 mg NAO Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 25 mg NBD-Cl Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 25 mg Nile Red Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 1 mg Quin-2 AM Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 1 mg Rhod-2，三鈉鹽 Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 5 mg Rhodamine 123 Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 PCR檢測(cè)試劑盒人 SP100 基因全長(zhǎng)ORF克隆 人 EPHX2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 人 GABRA4 基因全長(zhǎng)ORF克隆 人 MUS81 基因全長(zhǎng)ORF克隆 人 CYP1B1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 人 PGM3 基因全長(zhǎng)ORF克隆 人 NET1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 人 GDPD2 基因全長(zhǎng)ORF克隆 人 CPNE3 基因全長(zhǎng)ORF克隆 人 L3MBTL4 基因全長(zhǎng)ORF克隆 人 ASH2L 基因全長(zhǎng)ORF克隆"
注意事項(xiàng)： 1. 建議使用新鮮采取的動(dòng)物組織，若為長(zhǎng)期冷凍組織，應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致模板的降解，影響PCR效率。 2. 試劑Buffer AL若低溫保存，易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時(shí)間，也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min，以溶解沉淀，混勻后再使用。 3. 電泳檢測(cè)時(shí)，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則，電泳時(shí)會(huì)在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 4. 建議擴(kuò)增片段長(zhǎng)度1 kb以內(nèi)，以便擴(kuò)增效率佳。 ?5. 為了您的**和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作