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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貨號
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兔腦膜細胞
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詳見說明書
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FS-016502
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細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
主要功能：
（1）血管平滑肌細胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。
（2）表達鈣通道及ICAM-1和VCAM-1，參與血管壁的炎癥反應(yīng)。
（3）與血管的進展和穩(wěn)定有關(guān)。
生理變化：
（1）主動脈硬化。
（2）主動脈瘤
（3）主動脈鈣化。
基本特性：
（1）組織來源于正常大鼠大動脈組織。
（2）鑒定：肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色。
（3）原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（4）每凍存管細胞數(shù)：>5×105 cells/1ml。
（5）肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色驗證。
（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、酵母。
培養(yǎng)步驟：
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
DNA電泳分子量標(biāo)準(zhǔn)系列（DNA marker）（λDNA/EcoR I） Haemophilus medium
pPGKNeo pBR313
Blotto in TBS with azide 人血管內(nèi)皮細胞生長因子受體3(VEGFR-3/Flt-4)ELISA Kit
大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA Kit 柱式動物線粒體DNAout，PCR
Marinitoga litoralis medium pMMB208
pcDNA4/HisMax C(pcDNA4HisMaxC) 戊二醛（0.1M 磷酸緩沖液，pH7.4）溶液，2.5%
人中粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)ELISA Kit 大鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA Kit
植物DNAout Bennett's agar
pOSCAR pAB366Ben
Nassar Sha nklin 神經(jīng)膠質(zhì)細胞染色法神經(jīng)組織染色試劑盒
大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA Kit 小鼠甲狀腺素(T4)ELISA Kit
Deferribacter thermophilus medium 預(yù)混型丙烯酰胺-甲叉雙丙烯干粉（29：1）
pARO191 pSico PGK puro(pSicoPGKpuro)
兔腦膜細胞安格洛苷C 英文名稱：Angelo glycoside C 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光
蘆薈大黃素-8-O-葡萄糖苷 英文名稱：Aloe emodin -8-O- glucoside 規(guī)格：：HPLC≥98% 10mg/支 保存：：-20℃，避光
白藜蘆-3-O-β-D-葡萄糖苷 英文名稱：Resveratrol -3-O- beta -D- glucoside 規(guī)格：：HPLC≥98% 10mg/支 保存：：-20℃，避光
枸橘甙 英文名稱：Poncirin 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光
山柰酚-3-O-蕓香糖苷（煙花苷） 英文名稱：Kaempferol rutinoside (fireworks glycoside) -3-O- 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光
非洲防己堿，咖倫明, 非洲防 英文名稱：Palmatine, columbamine Ka Lun Ming, 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光
芍藥內(nèi)酯苷 英文名稱：Albiflorin 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光
環(huán)氧澤瀉烯 英文名稱：Epoxy Alisma ene 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光
利卡靈-B；利卡靈B 英文名稱：Licka Ling Ling B -B; pepole 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光
芥子堿硫酸鹽 英文名稱：Sinapine thiocyanate 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光
甜橙黃酮 英文名稱：The orange flavone 規(guī)格：：HPLC≥98% 20mg/支 保存：：-20℃，避光
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細胞能盡快通過*易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
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