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培養(yǎng)方法

傳代方法 將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長條件 37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。

存儲條件 凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用??布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時； 

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測。 

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率； 

5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

It is not found in the brain, testis, ovary, and peripheral blood leukocytes.

Function : Cytoskeletal protein that may act as an adapter that brings other proteins (like kinases) to the cytoskeleton.

Subunit : Interacts with alpha-actinins 1, 2 and 4.

Subcellular Location : Cytoplasm. Cytoplasm, cytoskeleton. Note=Associates with the actin stress fibers.

Tissue Specificity : Strongly expressed in the heart and skeletal muscle, moderately expressed in the spleen, small intestine, colon, placenta, and lung. A lower level expression is seen in liver, thymus, kidney, prostate and pancreas and is not found in the brain, testis, ovary, and peripheral blood leukocytes.

Similarity : Contains 1 LIM zinc-binding domain.

Contains 1 PDZ (DHR) domain.

Database links : UniProtKB/Swiss-Prot: O00151.4

英文名稱  Anti-P53(wt-p53) (D2F7)

中文名稱  腫瘤抑制基因野生型P53單抗

別    名  Widespread p53; Wtp53; Antigen NY-CO-13; Cellular tumor antigen p53; Cys 51 Stop; HGNC11998; LFS1; p53; p53 Cellular Tumor Antigen; p53 Tumor Suppressor; Phosphoprotein p53; TP53; Transformation related protein 53; TRP53; Tumor protein p53; Tumour Protein p53; P53_HUMAN; TP53.

濃    度  1mg/1ml

規(guī) 格  0.1ml/100μg  0.2ml/200μg

抗體來源  Mouse  

克隆類型  monoclonal

克 隆 號  D2F7

交叉反應(yīng)  Human, Mouse, Rat  

產(chǎn)品類型  一抗    
地塞米松核糖核苷酸還原酶小亞基M2檢測試劑盒氫化鈉 80%叔丁 GR，≥99.5% (GC)

鋅轉(zhuǎn)運蛋白8檢測試劑盒三乙烯二 98%叔丁 AR

抗RA33IgG抗體檢測試劑盒L-茶氨酸 99%叔丁 CP

半胱氨酸蛋白酶10檢測試劑盒N-乙酰神經(jīng)氨酸 98%叔丁 ACS，≥99.5% (GC)

基質(zhì)金屬蛋白酶9檢測試劑盒N-乙酰神經(jīng)氨酸甲酯  98%氯化血紅素 98%

碳酸酐酶檢測試劑盒N-羥乙酰神經(jīng)氨酸  ≥95% (HPLC)原卟啉二甲酯 95%

絲氨酸脫水酶檢測試劑盒碳酸鋰 AR,99.5%異煙酸 AR,99%