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培養(yǎng)方法

傳代方法 將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細胞剛有脫落時，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長條件 37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。

存儲條件 凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時； 

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。 

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應該為玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率； 

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

產(chǎn)品應用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  Flow-Cyt=1:100-500  IF=1:100-500

（石蠟切片需做抗原修復）

 not yet tested in other applications.

 optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.  

保存條件  Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.

Important Note  This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

產(chǎn)品介紹 Vital cellular functions such as cell proliferation and signal transduction are regulated in part by the balance between the activities of protein tyrosine kinases (PTK) and protein tyrosine phosphatases (PTPs). The protein contains a 121 residue extracellular domain, a single transmembrane segment, and 2 tandem intracytoplasmic catalytic domains. The PTP alpha protein is ubiquitously expressed and may play a fundamental role in the physiology of all cells.

Subcellular Location : Membrane; Single-pass type I membrane protein.

Similarity : Belongs to the protein-tyrosine phosphatase family. Receptor class 4 subfamily.

Contains 2 tyrosine-protein phosphatase domains.

Database links : UniProtKB/Swiss-Prot: P18433.2

英文名稱  Anti-phospho-PTPRA(Tyr798)

中文名稱  磷酸化酪氨酸磷酸酶α抗體

別    名  PTP alpha (phospho Y798); HEPTP; HLPR; HPTP alpha; HPTPA; HPTPalpha; Leukocyte common antigen related peptide; LRP; Protein tyrosine phosphatase alpha; Protein tyrosine phosphatase receptor type A; Protein tyrosine phosphatase receptor type alpha polypeptide; Protein tyrosine phosphate; Protein-tyrosine phosphatase alpha; PTPA; PTPalpha; PTPase alpha; PTPLCA related phosphatase; PTPRA; PTPRA_HUMAN; PTPRL 2; PTPRL2; PTRA; R PTP alpha; R-PTP-alpha; Receptor type tyrosine protein phosphatase alpha; Receptor-type tyrosine-protein phosphatase alpha; RPTPA; Tyrosine phosphatase alpha.

濃    度  1mg/1ml

規(guī) 格  0.1ml/100μg

抗體來源  Rabbit  

克隆類型  polyclonal
馬血清（國產(chǎn)）黑色素瘤相關抗原D4檢測試劑盒1-丁基-3-甲基咪唑甲磺酸鹽 99%二異 CP,98%

白介素1受體樣1檢測試劑盒1-丁基-3-甲基咪唑磷酸二丁酯鹽 96%N,N-二異基乙 99%

黑色素瘤相關抗原D4抗體檢測試劑盒2-溴-3-硝基吡啶 98%N,N-二異基乙二  97%

胱抑素SN檢測試劑盒1-丁基-3-甲基咪唑雙鹽 97%四甲基氫氧化銨 AR,25%水溶液

肌球蛋白ⅦA檢測試劑盒1-丁基-3-甲基咪唑硝酸鹽 95%原甲酸酯 98%

鈉-葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白2檢測試劑盒1-丁基-3-甲基咪唑辛硫酸鹽 99%4-羥基苯甲酰肼 98%

趨化因子配體12檢測試劑盒1-丁基-3-甲基咪唑硫酸鹽 95%草酰乙酸 98%