細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

細(xì)胞處理方法：

以下細(xì)胞處理方法及細(xì)胞說(shuō)明書僅供參考，具體操作還需要根據(jù)到貨時(shí)細(xì)胞密度，細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)等具體情況，酌情處理，如需要更詳細(xì)技術(shù)指導(dǎo)。

一．貼壁細(xì)胞

客戶接收到細(xì)胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。

肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張）。

顯微鏡觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融匯至80%左右（可以傳代的情況下），細(xì)胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達(dá)到細(xì)胞傳代密度，培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。

用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。1000rpm,5min離心，重懸細(xì)胞。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃,5%CO2  培養(yǎng)。

二．懸浮細(xì)胞

1. 接收到細(xì)胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。

2. 肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張）。

3. 嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4. 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒）。

5. 1000rpm,5min離心，重懸細(xì)胞。 換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基，37℃,5%CO2培養(yǎng)。

冷凍保存細(xì)胞之方法

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

Post-translational modifications : Phosphorylated by the activated catalytic chain.

Similarity : Belongs to the cAMP-dependent kinase regulatory chain family.

Database links : UniProtKB/Swiss-Prot: P13861.2

英文名稱  Anti-phospho-PKA R2 (Ser96)

中文名稱  磷酸化蛋白激酶A受體2α亞基抗體

別    名  KAP2; KAP2_HUMAN; MGC3606; PKR 2; PKR2; PRKA R2; PRKAR 2; PRKAR2; PRKAR2A; Protein kinase A RII alpha subunit; Protein kinase cAMP dependent regulatory type II alpha; cAMP dependent protein kinase regulatory subunit alpha 2; cAMP dependent protein kinase regulatory subunit RII alpha; cAMP dependent protein kinase type II alpha regulatory chain; cAMP dependent protein kinase type II alpha regulatory subunit; cAMP-dependent protein kinase type II-alpha regulatory subunit; phospho-PKA R2 (Ser98)(human).

濃    度  1mg/1ml

規(guī) 格  0.1ml/100μg

抗體來(lái)源  Rabbit  

克隆類型  polyclonal

交叉反應(yīng)  Human, Mouse, Rat

產(chǎn)品類型  一抗  磷酸化抗體   

研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 學(xué) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

蛋白分子量  predicted molecular weight: 45kDa

性    狀  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated Synthesised phosphopeptide derived from mouse PKA R2 around the phosphorylation site of Ser96

亞    型  IgG

純化方法  affinity purified by Protein A
角質(zhì)細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基人類嗜T病抗體檢測(cè)試劑盒2-氨基吡啶 CP 99.995% tmetals basis

型肝炎病抗體檢測(cè)試劑盒2-氨基吡啶 99%乙酰乙酸甲酯  99%

核糖核酸酶H檢測(cè)試劑盒2-氨基-6-甲基吡啶 98%正辛酸 standard for GC, ≥99.5% (GC)

EB病抗體檢測(cè)試劑盒2-氨基-5-氯吡啶 98%正辛酸 CP,98%

血吸蟲抗體檢測(cè)試劑盒2-氨基-4-甲基??啶 98%正辛酸 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥99.9%(GC)

熱休克蛋白a檢測(cè)試劑盒2-溴吡啶 98%正辛酸 AR,99%

絲氨酸肽酶抑制因子Kazal型1檢測(cè)試劑盒2,6-二氨基吡啶 98%正辛酸 ≥98%, FG