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培養(yǎng)方法

傳代方法 將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細胞剛有脫落時，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長條件 37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。

存儲條件 凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉移至液氮中保存。

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）； 

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時； 

4．將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。 

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應該為玻璃**，并經過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率； 

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

Function : Tyrosine-protein kinase that acts as a cell-surface receptor for PDGFA, PDGFB and PDGFC and plays an essential role in the regulation of embryonic development, cell proliferation, survival and chemotaxis. Depending on the context, promotes or inhibits cell proliferation and cell migration. Plays an important role in the differentiation of bone marrow-derived mesenchymal stem cells. Required for normal skeleton development and cephalic closure during embryonic development. Required for normal development of the mucosa lining the gastrointestinal tract, and for recruitment of mesenchymal cells and normal development of intestinal villi. Plays a role in cell migration and chemotaxis in wound healing. Plays a role in platelet hypereosinophilic syndrome.

Defects in PDGFRA are a cause of gastrointestinal stromal tumor (GIST) [MIM:606764]. Note=Mutations that cause constitutive activation of PDGFRA may be a cause of gastrointestinal stromal tumor (GIST).

Similarity : Belongs to the protein kinase superfamily. Tyr protein kinase family. CSF-1/PDGF receptor subfamily.

Contains 5 Ig-like C2-type (immunoglobulin-like) domains.

Contains 1 protein kinase domain.

Database links : UniProtKB/Swiss-Prot: P16234.1

PDGFR-α是膜受體，具有酪氨酸酶的活性，與其配體PDGF結合后激活與細胞增殖有關的酶及基因。 PDGFR亦表達于上皮、內皮細胞，前列腺、皮膚、腎小球等上皮細胞均有PDGFR表達. 亦有學者報道血小板源性生長因子受體α抗體在細胞胞漿胞膜、胞核都有不同的表達還有人認為：PDGF及其受體一般表達于浸潤病變組織的炎癥細胞附近，組織缺血損傷、腎小球高壓、因素作用、炎癥細胞浸潤、實質細胞活化等導致PDGFR表達增強。

英文名稱  Anti-Phospho-PDGFRA(Tyr762)

中文名稱  磷酸化血小板源性生長因子受體α

別    名  PDGFRA(phospho Y762); PDGF Receptor alpha(Tyr849)/PDGF Receptor beta (Tyr857); Platelet–dirived growth factor receptor-alpha; Alpha platelet derived growth factor receptor; CD 140a; CD140a; CD140a antigen; MGC74795; PDGF alpha chain; PDGF R alpha; PDGFR 2; PDGFR A; PDGFR alpha; PDGFR2; PDGFRA; Platelet derived growth factor receptor 2; Platelet derived growth factor receptor alpha; Platelet derived growth factor receptor alpha polypeptide; PGFRA_HUMAN.

濃    度  1mg/1ml
DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)培養(yǎng)基β-防御素130檢測試劑盒2,2,2-三氟乙 99.5%二氧化鈦 CP,98.0%

乙型肝炎病X抗原檢測試劑盒2,2,2-三氟乙 分子生物學級，99.8%3-(4-)戊二酸 98%

透明質酸合酶1檢測試劑盒2,2,2-三氟乙 NMR grade, ≥99.8%(4-溴苯基)乙炔 97%

透明質酸合酶3檢測試劑盒(3,3,3-三氟基)二氯甲基硅烷 98%4-溴-2-氟苯甲 98%

低糖基化IgA檢測試劑盒二苯烷 99%4-溴乙基苯 99%

透明質酸合酶1檢測試劑盒碳化鎢 粉末，99.9% metals basis, <10μm1-溴-3-苯 98%

透明質酸合酶3檢測試劑盒三氟化甲絡合物 50-52 wt% BF3 1-溴-4-苯 98%