冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
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產(chǎn)品名稱
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兔**管內(nèi)皮細胞
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規(guī)格
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詳見說明書
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貨號
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BH-8010780
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細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
大黃酚4-Boc-1-乙lamin A 核纖層蛋白A抗原
蘆薈大黃素4-Boc-1-乙LOX-1/OLR1 凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體
MRSA顯色培養(yǎng)基楊梅素3,5-二代苯(含有數(shù)量不等的酐)LPLUNC1 人鼻咽癌癌基因多肽抗原
二氫楊梅素3,5-二代苯(含有數(shù)量不等的酐)LYVE-1(lymphalic vessel endotheilial hyaluronan receptor 1) **管內(nèi)皮透明質(zhì)受體抗原
李斯特菌顯色培養(yǎng)基阿魏3,5-二代苯(含有數(shù)量不等的酐)ACE( ACE, testis-specific isoform precursor) 血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(抗原)
白藜蘆1-溴-4-乙氧基-2,3-二苯Integrin alpha E2 peptide 整合素alpha E2抗原
李斯特菌鑒定顯色培養(yǎng)基虎杖苷（白藜蘆苷）1-溴-4-乙氧基-2,3-二苯Mac-1 (Mac-1/CR3/CD11b+CD18) 巨噬表面分子抗原
弧菌顯色培養(yǎng)基薄荷(S)-(-)-2-甲基-1-丁Mafa(avian)(V-maf musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog A) v-maf 肌腱膜纖維肉瘤癌基因同源物A抗原
丹皮酚(S)-(-)-2-甲基-1-丁MAGE-1 黑色素瘤相關
沙門氏菌顯色培養(yǎng)基丹酚A(S)-(-)-2-甲基-1-丁MAPKK1 (MAP kinase kinase 1) 絲裂原活化蛋白激酶激酶1抗原
丹酚B雙酚A甘油酯ASK1/MAPKKK5 凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1/絲裂原活化蛋白激酶激酶激酶5抗原
沙門氏+菌顯色培養(yǎng)基丹參IIA6-甲氧基萘-2-Maspin (mammary serine protease inhibitor) 抑癌基因抗原
丹參IIA-磺鈉6-甲氧基萘-2-Matriptase 蛋白裂解酶（一種新的癌基因）抗原
VRE顯色培養(yǎng)基丹參I3-芐氧基苯HCMV UL49(Human Cytomegalovirus UL49 Gene) 人巨病UL49抗原
假單胞菌顯色培養(yǎng)基二氫丹參Ⅰ3-芐氧基苯MC-1R (melanocortin-1-receptor) 黑皮質(zhì)素-1受體抗原
隱丹參3-芐氧基苯Mcl-1(myeloid cell leukemia 1) peptide 髓樣白血病-1抗原
B群鏈球菌顯色培養(yǎng)基丹參素鈉2-乙基-4-甲基噻唑MDM2 (urine double minute 2) 雙微體2癌基因抗原
ESBL顯色培養(yǎng)基冬凌草甲素2-異基-4-甲基噻唑MDR1(multidrug resistance 1) 多藥耐藥蛋白抗原
KPC顯色培養(yǎng)基輔酶Q102-異基-4-甲基噻唑MEF2(myocyte enhancer-binding factor 2) 肌增強因子2抗原
CTX-M顯色培養(yǎng)基防己（漢防己甲素）2,6-二氨基-4-嘧Mfn1 (Mitofusin1) 線粒體融合蛋白1
Agar 瓊脂防己諾林（漢防已乙素）2,6-二氨基-4-嘧MT(metallothionein) 金屬硫蛋白抗原
兔**管內(nèi)皮細胞Agar 瓊脂鬼臼素3-氨基-1-MGr1-Ag/37LRP(P37-kDa laminin receptor precursor) 層粘連蛋白受體1抗體
L-Arginine L-精氨葛根素3-氨基-1-MGr1-Ag/37LRP(P37-kDa laminin receptor precursor)(CT) 層粘連蛋白受體1抗原（C端）
L-Aspartic acid L-天門冬氨黃芪總皂苷LicofeloneMK(Midkine) 中期因子/肝素結(jié)合生長因子抗原
細胞處理方法：
以下細胞處理方法及細胞說明書僅供參考，具體操作還需要根據(jù)到貨時細胞密度，細胞生長狀態(tài)等具體情況，酌情處理，如需要更詳細技術指導。
一．貼壁細胞
客戶接收到細胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。
肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張）。
顯微鏡觀察細胞，當細胞融匯至80%左右（可以傳代的情況下），細胞應該在37度培養(yǎng)箱預溫1-2h后再做處理。如未達到細胞傳代密度，培養(yǎng)瓶應預留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。1000rpm,5min離心，重懸細胞。換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃,5%CO2 培養(yǎng)。
二．懸浮細胞
1. 接收到細胞，用75%的酒精（建議配制75%酒精的水是過的）培養(yǎng)瓶外部。
2. 肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張）。
3. 嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4. 將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒）。
5. 1000rpm,5min離心，重懸細胞。 換新的細胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基，37℃,5%CO2培養(yǎng)。
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