產(chǎn)品名稱：腦膜炎奈瑟菌
拉丁文: Neisseria meningitidis
分離基物: 腦膜炎患者的脊髓液
提供形式: 凍干粉
**等級(jí): 2
模式菌株: yes
應(yīng)用領(lǐng)域: 培養(yǎng)基測(cè)試
培養(yǎng)基: 哥倫比亞血平板（成品）(或者巧克力血平板）
生長(zhǎng)條件: 37℃，5%CO2，高濕度；5%～10%的CO2氣體。一般培養(yǎng)48小時(shí)后，腦膜炎奈瑟菌在培養(yǎng)基上形成圓形隆起、表面有光澤、透明或半透明、直徑約1mm～5mm的露滴樣粘液型菌落。無(wú)色素形成。血平板上無(wú)溶血現(xiàn)象。
生長(zhǎng)特性: 陰性球菌（雙球菌）
保存方法:
傳代保存法:培養(yǎng)基的濃度不宜過(guò)高,營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于適生長(zhǎng)溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種,則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。
液體石蠟覆蓋保存法:該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長(zhǎng),適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧等的保存。
懸液保存法:
① 蒸餾水保存法:適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。
② 糖液保存法:適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。
載體保存法:①土壤保存法;②砂土保存法;③硅膠保存法;④磁珠保存法;⑤麩皮保存法;⑥紙片(濾紙)保存法。
常用的冷凍保存法:
① 低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過(guò)多,有些可添加保護(hù)劑。此外,也可用φ5mm的玻璃珠來(lái)吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi),再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。
② 干冰保存法(-70℃左右):即將菌種管插入干冰內(nèi),再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。
③ 液氮保存法(-196℃):是適用范圍廣的微生物保存法。
微生物培養(yǎng)方法:
1、平板劃線分離法:把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面,通過(guò)分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞,經(jīng)培養(yǎng)后生長(zhǎng)繁殖成單菌落。
2、稀釋涂布平板法將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng),在稀釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞,從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。
上述兩種方法雖然都可以實(shí)現(xiàn)觀察菌落特征的目的,但平板劃線分離法不能對(duì)菌落計(jì)數(shù),而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過(guò)程復(fù)雜,對(duì)平板的要求比較高,可參照以下步驟:
a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃,向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均勻,然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿,輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿,使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部,待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。
b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g,放入盛100ml無(wú)菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中,振搖15~20min混合均勻,用一支1ml無(wú)菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無(wú)菌水的大試管中充分混勻,制成活性污泥混合液。
c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置,用無(wú)菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴(kuò)展,使之分布均勻。
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腦膜炎奈瑟菌培養(yǎng)基: 綜合PDA：馬鈴薯煮汁1000mL，磷酸二氫鉀 3g，硫酸鎂 1.5g，葡萄糖 20g，維生素B1 10mg，瓊脂 20g，pH自然。馬鈴薯煮液：200g馬鈴薯，去皮，切塊，放入蒸餾水中煮沸30min，取濾液定容至1000mL,備用。121℃，15min。
生長(zhǎng)條件: 25℃，好氧。
生長(zhǎng)特性: 在PDA平板培養(yǎng)基上（30℃、RH70%）落初為灰白色，后變?yōu)榛液种梁趾谏?，培養(yǎng)基為黑色，日生長(zhǎng)量為4.0cm；在全光條件下，15～20d產(chǎn)生黑色近球狀子實(shí)體，子座表面附滿絲。一個(gè)子座內(nèi)有多個(gè)分生孢子器
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