細(xì)胞系培養(yǎng)方法
傳代方法 將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時(shí)，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；
生長(zhǎng)條件 37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。
存儲(chǔ)條件 凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過(guò)夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。
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培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
CD146分子(CD146)ELISA試劑盒2-氯-3-甲基吡啶-5-酸 95%2-基硫 96%5'-三磷酸胞苷三鈉鹽
CD134分子(CD134)ELISA試劑盒2-氯吡啶-4-酸 97%乙酸硫噻唑 99%松弛素A(>98%，BR)
CD117分子(CD117)ELISA試劑盒5-氯噻吩-2-酸 97%2-(基硅)苯基三氟磺酸鹽 97%松弛素C(>98%，BR)
CD10分子(CD10)ELISA試劑盒2-氯吡啶-5-酸頻哪酯 98% 茶螺烷 technical, ≥90% (GC,mixture of isomers)松弛素 D(>98%，BR)
CC趨化因子受體7(CCR7)ELISA試劑盒2,6-二氟苯酸 98%二噻吩二硫 97%松弛素E(>98%，BR)
CC趨化因子受體5(CCR5)ELISA試劑盒2,6-二氟吡啶-3-酸 95%季酮酸 96%D-樟腦酸(>99%,BR)
CC趨化因子受體2(CCR2)ELISA試劑盒2,5-二酸 97%乙酸香蘭素酯 98%D(+)-二苯甲酰一水(>98%，BR)
CC趨化因子受體1(CCR1)ELISA試劑盒2,4-二氟苯酸 98%異丁酸香蘭素酯 ≥98%, FG己二烯二(>98%，BR)
CC趨化因子7(CCL7/MCP3/SCYA6/SCYA7)ELISA試劑盒2,5-二氟苯酸 97%香蘭基丁 96%十二烯基丁二酸酐(>98%，BR)
CC趨化因子5(CCL5/D17S136E/SCYA5)ELISA試劑盒2,3-二氯吡啶-4-酸 95%香草酸 98%癸二酸(>96%，BR)
CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白ε(C/EBPε)ELISA試劑盒4-(二甲基氨基)苯酸 95%反式-1,2-環(huán)己二 98%脫氫乙酸(>98%，BR)
CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白δ(C/EBPδ)ELISA試劑盒2,6-二氯吡啶-3-酸 95% 1，2-環(huán)己二 99%脫羰秋水仙堿
CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α(C/EBPα)ELISA試劑盒2,5-二氯吡啶-3-酸 95%反式-1，2-環(huán)己二四乙酸,一水 99%DON素，嘔吐素；脫氧雪腐鐮刀菌烯(>98%(HPLC),BR)
cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)ELISA試劑盒2,5-二氯吡啶-4-酸 95%卡鉑 98%第威德合金
Ca2+激活K+通道蛋白2(KCNN2)ELISA試劑盒2,6-二酸 98%反式-1.2-環(huán)己二四乙酸 98%二乙酰一肟(>98%，BR)
C4結(jié)合蛋白(C4BP)ELISA試劑盒2,4-二甲氧基嘧啶-5-酸 90%順鉑 Pt, 65%二丁基二月桂酸錫(>95%,BR)
細(xì)胞系1α羥化酶檢測(cè)試劑盒偶氮熒光桃紅 Dye content 90 %金雀花堿 98%
1-磷酸鞘氨檢測(cè)試劑盒全反式-β-阿林胡蘿卜 96%蟲(chóng)草素 98%
2,3-二磷酸甘油酸檢測(cè)試劑盒3-氨基吡啶 分析標(biāo)準(zhǔn)品大黃酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%
2,5寡腺苷酸合成酶檢測(cè)試劑盒氨基蝶呤 98%雙醋瑞因 ≥95%（HPLC)
2,5寡腺苷酸合成酶2檢測(cè)試劑盒草酸高鐵銨 98%黃豆苷原 98%
20-HETE檢測(cè)試劑盒殺草強(qiáng) 分析標(biāo)準(zhǔn)品大黃素 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥96.0% (HPLC)
25羥基維生素D檢測(cè)試劑盒烯基, 含穩(wěn)定劑銅, 97%漆黃素 98%
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃**，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
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