使用及效果:
標準的PCR反應體系:
10×擴增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱: PCR試劑盒
規(guī)格: 50次
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。

PCR反應特點
(1) 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在學中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。

PCR反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。
金櫻根(標準品)英文名稱: Eriocalyxin BG蛋白偶聯(lián)受體6抗體包裝25g
金櫻子(標準品)英文名稱: Sarsasapogeninλ輕鏈抗體包裝5g
金盞銀盤(標準品)英文名稱: 4'-Demethylpodophyllotoxin溶酶體相關(guān)膜蛋白2抗體包裝100g
筋骨草甾酮C英文名稱: Periplocin肺腺瘤易感蛋白2抗體包裝25g
錦燈籠(標準品)英文名稱: 1,2-Dilinoleoylglycerol 磷酸化RNA聚合酶相關(guān)蛋白LEO1抗體包裝500g
京大戟(標準品)英文名稱: 6-Bromoimidazo[1,2-a]pyrazine腫瘤抑制基因LATS2抗體包裝1g
京尼平(標準品)英文名稱: 1,2-Propanediol磷酸化白F肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體包裝5g
京尼平甙(標準品)英文名稱: TBBT;NSC 231634磷酸化腫瘤抑制基因LATS2抗體包裝1g
京尼平苷酸(標準品)英文名稱: 3-Hydroxyflavone;Flavonol磷酸化白F肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體包裝10g
荊芥(標準品)英文名稱: Ginkgolic Acid C17:1白F肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體包裝50g
荊芥穗(標準品)英文名稱: Ginkgolic Acid C15:1亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄因子樣1抗體包裝10g
九里香(標準品)英文名稱: Ginkgolic Acid C13:0層粘連蛋白B2γ1抗體包裝50g
九里香(千里香)(標準品)英文名稱: AZD-9291(free base)磷酸化T活化連接蛋白抗體包裝1g
九香蟲(標準品)英文名稱: AZD-9291 mesylate磷酸化T活化連接蛋白抗體包裝5g
韭菜子(標準品)英文名稱: Nisin低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1抗體包裝5g
PCR試劑盒纖維母生長因子6抗體梨苷 Aflatoxin B2
球蛋白A Fc段受體1抗體梨果(標準品) Aflatoxin G1
脂肪延長酶抗體梨葉(標準品) Aflatoxin G2
巖藻糖轉(zhuǎn)移酶2抗體芒柄花苷(標準品) Alizarin yellow R , sodium salt
雞白痢、雞傷寒抗體芒柄花素;芒柄花黃素(標準品) ALL, D-Allose
范可尼貧血相關(guān)蛋白F抗體玫果(標準品) alpha-D-Glucose-1-phosphate, disodium salt, hydrate
卵泡抑素抗體囊(標準品) alpha-Methylcinnamic acid
Fas活化的絲/蘇氨激酶抗體桐 Aluminum acetate, basic
脆性組氨三聯(lián)體抗體五加(標準品) Aluminum fluoride trihydrate
脂氧素受體1抗體IL-32/NK4/FITC 熒光素標記白介素32抗體IgG
半胱氨酸蛋白酶8相關(guān)蛋白2抗體IL-33/NFHEV/FITC 熒光素標記白介素33抗體IgG
設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
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