細胞系建立是科研中關鍵的實驗步驟之一，其核心在于獲取具有穩(wěn)定遺傳特征的細胞群體。然而，由于操作不當或缺乏定期檢測，常會出現(xiàn)以下問題：

一、細胞生長緩慢：

可能由于培養(yǎng)基不適宜、血清質量差、傳代操作不當、換液過于頻繁、細胞密度超過合適范圍、傳代次數(shù)過多或存在支原體污染。

二、細胞生長不佳：

需要詳細觀察和記錄，考慮培養(yǎng)條件、試劑、污染等因素，有時可能需要從頭開始使用新的試劑和細胞。

三、**、**和支原體污染：

這些微生物會嚴重干擾細胞培養(yǎng)，可能導致細胞死亡、生長緩慢或PH值變化。需要采取嚴格的無菌操作和使用***預防。

四、細胞貼壁不佳：

可能因細胞類型、培養(yǎng)基成分或表面處理不當導致。對于原代細胞，可能需要特定的包被液如多聚賴氨酸或牛血漿纖連蛋白。

五、細胞形態(tài)變化和分化：

特別是對于人胚胎干細胞，可能因培養(yǎng)基種類、基質膠使用不當或操作錯誤導致分化。

六、單克隆源性驗證困難：

有限稀釋法可能仍存在多克隆污染，影響數(shù)據(jù)可靠性。

七、基因表達不穩(wěn)定：

外源基因整合位點隨機，可能因表觀沉默或啟動子丟失導致表達下調。

八、三維培養(yǎng)挑戰(zhàn)：

剪切應力與傳質速率難以平衡，影響組織形成。

解決這些問題通常需要細致的操作、合適的培養(yǎng)條件、嚴格的無菌技術、以及在必要時使用特定的工具和試劑。?