細胞劃痕(修復)法是一種簡捷的測定細胞遷移運動與修復能力的方法,類似體外傷口愈he 模型。細胞劃痕實驗步驟:
1、 先用marker筆在6孔板背后,用直尺比著,均勻的劃橫線,大約每隔0.5~1cm一道,橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。
2、 在孔中加入約5×105個細胞,培養(yǎng)細胞至匯合度達到90%以上。
3、 用頭比著直尺,垂直于背后的橫線劃痕。
4、PBS洗細胞3次,去除劃下的細胞,加入無血清培養(yǎng)基。
5、 放入37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。按0,12,24,48h時間點取樣,100倍鏡下拍照。如果細胞遷移(修復)能力較強,需相應縮短觀察時間間隔。
(6) 結(jié)果分析:對不同時間點不同處理分組的劃痕間距進行分析。