巢式PCR通過獨特的兩輪擴增設計，在靈敏度上顯著優(yōu)于普通PCR，其核心優(yōu)勢體現(xiàn)在以下方面：

一、克服平臺期效應：

常規(guī)PCR在擴增到一定循環(huán)數(shù)后，由于底物耗盡或產(chǎn)物積累，擴增效率會下降，進入平臺期。而巢式PCR通過兩輪擴增，每輪都可以從頭開始，理論上可以進行更多的循環(huán)，從而提高擴增倍數(shù)，克服了單次擴增的平臺期限制。

二、極低模板檢測能力：

1、微量樣本適配性：可從10?基因組背景中檢測到1個拷貝的病毒基因，適用于病毒載量極低的早期感染（如HIV、HBV）或痕量DNA樣本（如法醫(yī)物證）。

2、模板濃度寬容度：對初始模板量要求遠低于普通PCR，當普通PCR因模板量不足無法擴增出條帶時，巢式PCR仍可有效檢出。

三、技術(shù)原理層面的靈敏度提升機制：

1、兩輪級聯(lián)擴增

l 第yi輪使用外部引物初步擴增目標序列，產(chǎn)物作為第er輪模板；

l 第er輪通過內(nèi)部引物對特異性片段二次放大，實現(xiàn)信號級聯(lián)增強。

2、引物設計優(yōu)化

內(nèi)部引物位于外部引物擴增產(chǎn)物內(nèi)部，進一步聚焦目標序列，減少背景干擾。

四、提高PCR的敏感性：

由于進行了兩次擴增，巢式PCR可以從低拷貝數(shù)的樣本中擴增出足量的產(chǎn)物，特別適用于檢測稀有或低豐度的DNA序列。

四、應用場景中的靈敏度優(yōu)勢：

1、?低豐度樣本檢測?

如結(jié)核分枝桿菌胃液檢測中，巢式PCR靈敏度顯著高于抗酸染色法（97.4% vs 50.64%）。

2、?復雜樣本分析?

在大黃魚弧菌病檢測中，三輪巢式PCR可檢出2.5 copies/μL的哈維氏弧菌。

五、注意事項：

1、?假陽性風險?：需嚴格分步操作，避免交叉污染。

2、?成本與時間?：靈敏度提升伴隨實驗步驟增加，需權(quán)衡效率與需求。?

巢式PCR的靈敏度優(yōu)勢使其成為微量核酸檢測的金標準技術(shù)，尤其在jibing早期診斷、復雜樣本分析等場景中具有不可替代的價值。實際應用中需結(jié)合樣本特性與實驗條件，平衡靈敏度與操作可行性。