高效液相色譜儀測(cè)定香草蘭豆英中香蘭素的含量
1、原理
試樣進(jìn)行抽提和稀釋，加人內(nèi)標(biāo)物，用高效液相色譜儀分離，再用紫外檢測(cè)器測(cè)定香蘭素的含量。
2、試劑
分析純?cè)噭?、蒸餾水、去離子水或相等純度的水。
乙醇：95% (體積分?jǐn)?shù))。
甲醇：色譜純
磷酸溶液: 0.01 mol/L,
流動(dòng)相:用25份甲醇與75份稀磷酸混合。用膜過濾、脫氣。
香蘭素(4-經(jīng)基一3一甲氧基苯甲醛)對(duì)照標(biāo)樣：純度大于99% .
內(nèi)標(biāo)物:乙酞水楊酸，純度大于99% 。
3、香蘭素儲(chǔ)備液:
稱取一定量的香蘭素,準(zhǔn)確至0.001g。用流動(dòng)相配制成為濃度為1g/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。
4、工作溶液
用流動(dòng)相稀釋儲(chǔ)備液，獲得工作溶液。香蘭素工作溶液濃度為0.1gL，可在4℃下暗處保存不超過10 天。
5、內(nèi)標(biāo)物溶液
將乙酞水楊酸溶解于流動(dòng)相中，使其濃度為0.6 g/L，稱量時(shí)準(zhǔn)確至0.001 g。
注: 內(nèi)標(biāo)濃度應(yīng)與樣品溶液中香蘭素濃度基本一致.
6、儀器
氣密研磨器。
單標(biāo)容量瓶，容量為100 mL 和200 mL。
過濾膜，孔徑為0.45um 。
連續(xù)型索氏抽提儀，由下列部件組成。
連續(xù)型索氏抽提儀：125 mL 索氏抽提器。
冷凝器。
250 mL 磨口燒瓶。
熱源:帶有滑動(dòng)變阻器或其他控?zé)岱绞降碾姛崽谆蛴驮 ?/span>
高效液相色譜儀:配紫外檢測(cè)器;
色譜柱:C18，硅膠柱，5um - 10um 粒徑。
注射器:用于高效液相色譜儀。
分析天平：準(zhǔn)確度為0.001 g.
7、試樣的制備
將樣品(香草蘭豆莢、切段或香草蘭粉)研磨并使之充分混勻。稱20g已制備好的樣品，準(zhǔn)確至0. 001g,在抽提儀器中用大約200 mL 乙醇抽提試樣16h，即溶劑進(jìn)行25次~ 30 次循環(huán)。
每100g 豆莢用1L溶劑抽提。將抽提物轉(zhuǎn)移至一個(gè) 200mL的容量瓶中。用少量的乙醇清洗抽提儀器中的燒瓶數(shù)次，并將洗出液加人容量瓶中，乙醇定容并混合均勻。用流動(dòng)相稀釋該溶液 10 倍。
8、分析步驟
流動(dòng)相流速大約為 1 mL/min，室溫進(jìn)行分析。
用 10 mL 內(nèi)標(biāo)物與10 mL 根據(jù)制備的樣品溶液混合。用膜過濾，上高效液相色譜儀測(cè)試。待測(cè)定的物質(zhì)的質(zhì)量用式(2)計(jì)算:
? ? ( 2 )
注: 式中的峰高可由其峰面積代替
高效液相色譜儀測(cè)定香草蘭豆英中香蘭素的含量
高效液相色譜儀測(cè)定香草蘭豆英中香蘭素的含量
高效液相色譜儀測(cè)定香草蘭豆英中香蘭素的含量
高效液相色譜儀測(cè)定香草蘭豆英中香蘭素的含量