高效液相色譜儀測定蘋果酒中蘋果酸及乳酸含量
本文系統(tǒng)研究了蘋果酒有機酸的高效液相色譜儀分析法，對色譜柱的型號、流動相的配比、流速、檢測波長等色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化 。
1、實驗材料
實驗室自制的蘋果酒樣品；L蘋果酸(色譜純)；L一乳酸(色譜純)；L一蘋果酸(分析純) ；甲醇 (色譜 純) ；甲酸(色譜純 )。
2、實驗儀器
分析天平0.1mg；
漩渦混合器 ；
數(shù)控超聲波清洗器 ；
循環(huán)式多用真空泵 ；
高效液相色譜儀 ，配紫外檢測器 ；
pH計 。
3、樣品預(yù)處理
將蘋果酒樣品在室溫靜置平衡后 ，先經(jīng)濾紙過濾 ，再經(jīng)0.45um微孔濾膜過濾，稀釋 3.3倍 ，直接進(jìn)樣 。
4、儀器及其條件
色譜柱：C18 (3.5um X4.6mm ×75mm )；
柱溫：25℃ ；
流動相：0.1%甲酸 + 3%甲醇 ，使用前經(jīng)過0.45um混合纖維樹脂膜抽真空過濾 ；
流速 ：0.5mL／min ；
進(jìn)樣量 ：20ul；
檢測波長：210nm 。
有機酸定性：將蘋果酒提取液色譜圖與蘋果酸、乳酸標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖進(jìn)行對照，根據(jù)保留時間初步確定蘋果酒中有機酸種類，同時用加樣外標(biāo)法和光譜圖數(shù)據(jù)進(jìn)行輔助定性
有機酸定量：配制L一蘋果酸和L一乳酸的混合標(biāo)液作為母液，依次稀釋得到6個濃度 (蘋果酸5000、4000 、3000、2000、 1000 和 500mg／L ；乳酸 2000 、 1500、 1000 、500、 200 和 100mg／L )。
各濃度梯度的混合標(biāo)樣按照高效液相色譜儀分析條件進(jìn)行實驗，每個水平點重復(fù)進(jìn)樣3次，以峰面積 (Y) 對質(zhì)量濃度(X，mg／L)作圖，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線 。
5、色譜柱的選擇
在蘋果酒的有機酸高效液相色譜儀檢測中，重要的是優(yōu)選有機酸的色譜分離條件，這些條件涉及 色譜柱型號 、流動相配比、流速 、檢測波長等 。
液相色譜柱是高效液相色譜儀的分離系統(tǒng)，在混合物中各組分準(zhǔn)確定性定量方面起著重要的作用，為了使蘋果酒在高效液相色譜儀上有良好的分離效果，首先對使用的色譜柱進(jìn)行了優(yōu)選 。
本實驗選 用了3 種型號的柱子 ，即
①C18柱 ，5um ×4.6mm× 250mm ；
② T3柱，5um × 4.6mm ×250mm；
③ C18柱，3.5um ×4.6mm ×75mm 。
以蘋果酸一乳酸混合標(biāo)樣及自制蘋果酒為樣品考察了3 種柱子的分離效果，在相同的洗脫程序下進(jìn)行測試，得到的色譜圖，在相同的分析時間下T3 柱具有更好的分離效果；而考慮分離效果近似的情況下 ，C18柱能在*短的時間內(nèi)將蘋果酸和乳酸有效分離，只需12min即可分析一個樣品。這是由于所 的 C18 柱(3.5um ×4.6mm ×75mm) 是一種快速分離色譜柱 ，該柱顆粒粒徑比普通柱要小，為 3.5um ?？焖俜蛛x柱高效液相色譜儀與傳統(tǒng)高效液相色譜儀相比，具有分離時問短 ，分析速度快，流動相消耗小，分析成本低等優(yōu)點。為高效地完成測試工作，本研究在各峰分離效果較好的前提條 件下，盡可能讓所需的分離時間縮短，因此我們*終選擇了 C18(3.5um ×4.6mm ×75mm) 柱作為實驗用分析柱
高效液相色譜儀測定蘋果酒中蘋果酸及乳酸含量
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