高效液相色譜儀測定富馬酸和馬來酸的含量
用高效液相色譜儀法，在選定的工作條件下，通過色譜柱使樣品溶液中各組分分離，用紫外吸收檢測器檢測，用外標法定量，計算樣品中富馬酸及馬來酸的含量。
1、 試劑和材料
1.1 富馬酸：質(zhì)量分數(shù)≥99.0%。
1.2 馬來酸：質(zhì)量分數(shù)≥99.0%。
1.3 氫氧化鈉溶液：20g/L。
1.4 磷酸溶液：量取磷酸（優(yōu)級純）(1±0.02)mL于1000mL容量瓶中，加入100mL甲醇（HPLC級，可根據(jù)柱效調(diào)整加入量），加水稀釋至刻度，再經(jīng)0.45μm濾膜過濾。
2、 儀器和設(shè)備
2.1 高效液相色譜儀系統(tǒng)(HPLC)
2.1.1 高壓泵：無脈沖，能將流速保持在0.1mL/min～10.0 mL/min。
2.1.2 定量環(huán)：5μL。
2.1.3 紫外光檢測器：可變波長。
2.1.4 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：色譜工作站或數(shù)據(jù)處理機。
2.2 抽濾系統(tǒng)
抽濾系統(tǒng)使用孔徑為 0.45μm 的纖維素酯膜濾紙（用于流動相的預處理）。
2.3 過濾系統(tǒng)
過濾系統(tǒng)使用孔徑為 0.45μm 的纖維素酯膜濾紙（用于樣品的預處理）。
2.4 進樣器
自動進樣器或微量進樣器，50μL或100μL。
3、 色譜分析條件
推薦的色譜柱及典型色譜操作條件見表 A.1，富馬酸和馬來酸測定典型高效液相色譜儀圖見附錄 C圖 C.1，各組分的相對保留時間見附錄 C 表 C.1。其他能達到同等分離程度的色譜柱和色譜操作條件均可使用。
4、 分析步驟
4.1 標準樣品溶液的制備
4.1.1 富馬酸標準樣品溶液的制備
稱取 50mg 富馬酸，準確至 0.0002g,溶于適量水（必要時加入少量氫氧化鈉溶液），轉(zhuǎn)移至 50mL容量瓶，用磷酸溶液稀釋至刻度。移取上述溶液（1±0.02)mL ,置于 50mL 容量瓶，用磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻，經(jīng) 0.45μm 濾膜過濾，再經(jīng)超聲波脫氣處理。
4.1.2 馬來酸標準樣品溶液的制備
稱取 50mg 馬來酸，準確至 0.0002g,溶于適量水（必要時加入少量氫氧化鈉溶液），轉(zhuǎn)移至 250mL容量瓶，用磷酸溶液稀釋至刻度。移取上述溶液（1±0.02)mL ,置于 100mL 容量瓶，用磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻，經(jīng) 0.45μm 濾膜過濾，再經(jīng)超聲波脫氣處理。
4.2 樣品溶液的制備
稱取 0.2 g 實驗室樣品，準確至 0.0002g, 置于 50mL 容量瓶，以流動相稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45μm 濾膜過濾，再經(jīng)超聲波脫氣處理。
4.3 測定
按高效液相色譜儀操作規(guī)程開機預熱,調(diào)節(jié)溫度及流量,達到分析條件并基線平穩(wěn)后,將標準樣品溶液進樣。用微量進樣器取標準樣品溶液 5μL，進樣（或自動進樣）,記錄所得的富馬酸或馬來酸的峰面積A 2 。
用微量進樣器取樣品溶液 5μL，進樣（或自動進樣）,記錄所得的待測物質(zhì)的峰面積 A 1 。
5、 結(jié)果計算
富馬酸或馬來酸的質(zhì)量分數(shù) w 2 ，數(shù)值以%表示，按式(A.3)計算：
…………………………（A.3）
式中：
A 1 —— 樣品液中待測物質(zhì)的峰面積；
A 2 —— 標準樣品溶液中富馬酸或馬來酸的峰面積；
m 2 —— 標準樣品溶液中富馬酸或馬來酸的進樣量，單位為微克(μg)；
m —— 樣品的進樣量,單位為微克(μg)
高效液相色譜儀測定富馬酸和馬來酸的含量
高效液相色譜儀測定富馬酸和馬來酸的含量
高效液相色譜儀測定富馬酸和馬來酸的含量
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