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高效液相色譜儀測定葡萄籽提取物中原花青素的含量
高效液相色譜儀測定葡萄籽提取物中原花青素的含量



以葡萄籽提取物為原料 ，采用經(jīng)預處 理的AB- 8 型大孔樹脂吸附純化，以不同濃度的乙醇進行梯度洗脫，洗脫液經(jīng)真空干燥的原花青素固體；采用高效液相色譜儀對分級產(chǎn)物進行定性、定量分析。
 
1. 液相色譜條件 
流動相：A 為 2%冰醋酸；B為乙腈∶水∶冰醋酸(80∶19.6∶0.4)；
 
檢測波長：280 nm；
 
流速：1.0 mL/min；
 
色譜柱：反相 C18 柱；
 
梯度程序見下表 。
2. 對照品測定 
精密稱取原花青素標準品約 50mg，置 10 mL 棕色容量瓶中，加入 50%乙醇，超聲溶解放冷至室溫，定容，搖勻，配制成原花青素 5mg/mL 的對照品溶液。過 0.45 μm 濾膜，10μL 進樣進行 高效液相色譜儀分析。
 
3.樣品制備
將預處理好的 AB- 8 型大孔吸附樹脂裝入色譜柱中，將已知濃度原花青素樣品溶液以適宜的流速加入色譜柱，分批收集流出液，并采用香草醛 -硫酸法測定其濃度。待流出液濃度達到樣品液濃度 1/10 時 ， 停 止 加 樣 ， 用 4 倍 柱 床 體 積 (BV)的去離子水以 2 BV/h 的流速洗柱子；洗完后依次用體積分數(shù)為 20%、30%、40%、50%、60%的乙醇對原花青素進行梯度洗脫，洗脫流速 2 BV/h， 各 4 BV，分批收集各流出液，進行真空干燥得到不同濃度乙醇洗脫條件下的成品。
 
4.樣品檢測及含量測定
精密稱取不同濃度乙醇洗脫條件下(20%、30%、40%、50%、60% )的成品各約50 mg 置 10 mL 棕色容量瓶中，加入 50%乙醇，超聲溶解放冷至室溫，定容，搖勻，過 0.45 μm 濾膜，10 μL 進樣進行高效液相色譜儀分析，通過原花青素標準譜圖判斷不同濃度乙醇洗脫液中低聚體、高聚體的存在狀況。
 
5.含量測定 
結合原花青素標準譜圖和高效液相色譜儀分析結果，對不同濃度乙醇洗脫液中 OPC含量測定。

高效液相色譜儀測定葡萄籽提取物中原花青素的含量

高效液相色譜儀測定葡萄籽提取物中原花青素的含量

高效液相色譜儀測定葡萄籽提取物中原花青素的含量

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