磺胺類（三合一）試劑盒
產品介紹
【原理】
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺甲基嘧啶、酞?；青邕?、磺胺甲噻二唑、磺胺對甲氧嘧啶、磺胺異噁唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺多辛、磺胺喹噁啉、磺胺甲氧噠嗪、磺胺氯噠嗪、磺胺苯酰與微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗磺胺的抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含磺胺類**的含量成負相關，與標準曲線比較即可得出殘留物磺胺類**的含量。
【試劑盒技術指標】
規(guī) 格：96孔/盒
靈 敏 度：0.2ppb
檢測時間： 45min
磺胺類（三合一）試劑盒樣本檢測下限：
組 織 （高檢測限方法）……………………………0.2ppb
組 織 （低檢測限方法）……………………………1ppb
蜂 蜜…………………………………………………0.2ppb
血 清 、 尿 液 ………………………………………0.8ppb
牛 奶……………………………………………… 4ppb
樣本回收率：
組 織 、 蜂 蜜 ……………………………… 85% ±25%
尿樣、牛奶、血清………………………… 70% ±20%
交 叉 率 ：
磺胺嘧啶（SD或SDZ）……………………………100 %
磺胺甲基嘧啶（SM1 ）…………………………… 82%
磺胺二甲基嘧啶（SM2） ………………………… 121%
由交叉率可以得出：該試劑盒可用于磺胺多種殘留物的檢測，完全滿足國家磺胺類多殘留種類檢測的要求。
【試劑盒組成】
1． 微量測試孔：每條8孔，一板12條
2． 標 準 液×6瓶：（1ml/瓶） 0ppb、0.2ppb、0.6pb、 1.8ppb、5.4ppb、16.2ppb
3． 酶標記物 7ml ……………………… 紅色帽
4． 抗體工作液 7ml ……………………… 綠色帽
5． 底物A液 7ml …………………………白色帽
6． 底物B液 7 ml …………………………黑色帽
7． 終止液 7 ml …..…………………… 黃色帽
8． 20X濃縮洗滌液40 ml ………………… 透明帽
9． 2X濃縮復溶液 50 ml ………………… 藍色帽
磺胺類（三合一）試劑盒【所用儀器、試劑】
具備的儀器：微孔酶標儀、打印機、均質器 、氮氣吹干裝置、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）
微量移液器：單道20μl-200μl，100μl-1000μl、多道250μl
試 劑：乙酸乙酯、正己烷、Na2HPO4·12H2O、NaOH NaH2PO4·2H2O、濃HCL、二氯甲烷
【樣本前處理步驟】
樣本前處理須知
處理任何樣本時，都必須注意：
（a）本試劑盒所檢測的組織樣本包括：動物組織、禽類和水產組織。eg:雞、鴨、牛、兔、魚、蝦等。
（b）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
（c）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結果。
樣本前處理需配制：
配液1、0.2M NaOH溶液稱取0.8gNaOH用去離子水100ml溶解。
配液2、0.5M鹽酸溶液4.3ml濃HCL加入去離子水定容至100ml混勻。
配液3、0.02M PB緩沖液稱取2.58g Na2HPO4·12H2O和0.44g NaH2PO4·2H2O加去離子水500ml溶解。
配液 4、乙腈-二氯甲烷混合溶液V乙腈-V二氯甲烷 = 1 : 4
配液5、樣本復溶液：將2×濃縮復溶液用去離子水以1：1?。?份濃縮復溶液+1份去離子水），用于樣本提取后的復溶。
（a ）組織高檢測限處理方法一：
1、稱2.0±0.05g均質過的組織樣本于50ml離心管中；加入乙腈-二氯甲烷混合溶液8ml，振蕩2min，4000r/min以上，15℃離心10min；
2、取4ml上層清澈有機相至干燥溶器中，56℃氮氣吹干/旋轉蒸發(fā)至干；
3、用1ml稀釋后的復溶液溶解干燥的殘留物，加入正己烷1ml混合30s，4000r/min以上，15℃離心5min；
5、去除上層取下層50μl液體用于分析
樣本稀釋倍數(shù)：1倍
（b）組織高檢測限處理方法二：
1、稱取3±0.05g勻漿物置離心管中，先加入3ml0.02M PB緩沖液充分振蕩混勻，再加入4ml乙酸乙酯和2ml乙腈，充分振蕩10min，于15℃，4000r/min以上速度離心10min；
2、移取2ml上層液體（約相當于1g的樣本）在50-60℃氮氣或空氣吹干；
3、加入1ml正己烷溶解干燥的殘留物，再加入1ml稀釋后的復溶液強烈振蕩1min，室溫
4000r/min，離心5min，除去上層液；
4、取50μl下層用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：1倍
注：在使用國家規(guī)定*高殘留限量（100ppb）進行判定時，需進行5倍稀釋（1份樣本液+4份已稀釋好的復溶液）。
（c） 組織低檢測限處理方法
1、稱取2.0±0.05g均質過的組織樣本于50ml離心管中；加入8ml0.02M PB緩沖液，充分振蕩2min，于15℃，4000r/min以上速度離心10min
2、取50μl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：5倍
（d） 血清樣本
1、將血樣本于室溫放置30min，于10℃，4000r/min以上離心10min，分離出血清或過濾血清；
2、 取1ml血清，加入3ml 0.02 M PB緩沖液混合，混合30s；
3、 取50μl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：4倍
（e）蜂蜜
1、 稱取1±0.05g蜂蜜樣本于50ml離心管中，加入1ml0.5M鹽酸 置于37℃環(huán)境中30min；
2、 加入2.5ml 0.2M 氫氧化鈉 (將PH值調至5左右)再加入4ml乙酸乙脂振蕩5min，4000r/min以上室溫離心10min；
3、 取2ml上層液體于50℃下氮氣吹干，加0.5ml 已稀釋好的復溶液復溶，混合30s；
4、 取50μl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：1倍
（f）尿液
1、 用3ml0.02 MPB緩沖液與1ml經(jīng)離心后的清亮尿樣本混合，混合30s；
2、 取50μl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：4倍
（g）牛奶
1、取1ml牛奶樣本用0.02 MPB緩沖液按1︰19（v/v）稀釋（即20μl牛奶+380μl0.02 MPB緩沖液），混合30s；
2、取50μl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：20倍
磺胺類（三合一）試劑盒【酶標**分析程序】
測定前應須知：
1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20-25℃）。
2、使用之后立即將所有試劑放回2-8℃環(huán)境。
3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
4、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。
操作步驟：
1、 將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、 按板架及需要取出微孔條，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、 配液：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗
滌液。
4、 編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
5、 加標準品/樣本50μl /孔，然后加酶標記物50μl/孔，再加入抗體工作液50μl/孔。輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板，25℃環(huán)境反
應30min。
6、 取出用洗滌液按每孔250μl洗板4-5次，每次浸泡15-30秒，拍干（拍干后未被**的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
7、 顯色：每孔加入底物液A液50μl再加B液50μl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境避光顯色15min。
8、 測定：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測在5min內讀完數(shù)據(jù)），
測定吸光度值（OD值）。
磺胺類（三合一）試劑盒【結果判定】
結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與磺胺類**的含量成負相關。
1、 粗略判定
用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng /ml)。假設樣本1的吸光度值為0.221，樣本2的吸光度值為0.795，標準液吸光度值分別是：0ppb為1.81；0.2ppb為1.50；0.6ppb為1.114；1.8ppb為0.660； 5.4ppb為0.318；16.2ppb為0.145。則樣本1的濃度范圍是5.4ppb-16.2ppb；樣本2的濃度范圍是0.6ppb-1.8ppb。乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中磺胺類**實際含量。
2、 定量分析
（1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以**個標準（0標準）的吸光度值，再乘以100%，即：
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值
（2）標準曲線的繪制與計算
以標準品百分吸光率為縱坐標，以磺胺類**濃度（ng /ml）的半對數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中磺胺類**實際含量。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。（歡迎來電索?。?b>
3、標準曲線：
B/B0 (%)
0.2 0.6 1.8 5.4 16.2
(ppb) [μg/kg]
圖1：磺胺類**檢測試劑盒的回歸曲線
4、再現(xiàn)性：
%CV
0 0.2 0.6 1.8 5.4 16.2
(ppb) [μg/kg]
圖2：磺胺類**檢測試劑盒的精密度
由多個不同的實驗結果確定了精密度，圖2顯示出磺胺類藥檢測試劑盒的精密度情況，獲得的標準吸收值的變異系數(shù)（%CV）對相應磺胺類藥濃度作曲線，可以看到在全部范圍內變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。
【注意事項】
1、 使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標本沒有回到室溫（20-25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2、 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著出現(xiàn)標準曲線不成線性，重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
3、 混合要均勻，否則會出現(xiàn)重復性不好的現(xiàn)象。
4、 反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、 不要使用過了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號的盒中試劑。
6、 不用的微孔板放進自封袋密封；標準物質和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、 顯色液若有任何顏色表明變質，應當棄之。0標準的吸光度值小于0.5個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質。
8、 該試劑盒*佳反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
【儲存】
原包裝應儲存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。
【有效期】
有效期12個月;生產日期、有效期、生產批號見外包裝。
- 溫馨提示：為規(guī)避購買風險，建議您在購買前務必確認供應商資質與產品質量。
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