喹乙醇試劑盒
產(chǎn)品介紹
【產(chǎn)品簡介】
喹乙醇又稱喹酰胺醇，商品名為倍育諾、快育靈，由于喹乙醇有中度至明顯的蓄積毒性，對大多數(shù)動物有明顯的致畸作用，對人也有致畸形，致突變，致癌，因此喹乙醇在美國和歐盟都被禁止用作飼料添加劑?！吨袊F藥典》(2005 版)明確規(guī)定，喹乙醇被禁止用于家禽及水產(chǎn)養(yǎng)殖。本喹乙醇快速檢測試劑盒具有方便、快速、靈敏等特點，適用于動物組織（水產(chǎn)、雞、豬、牛）、飼料等大批量樣品中的喹乙醇快速檢測。
喹乙醇試劑盒【測定原理】
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測等樣本中的喹乙醇，在微孔條上預包被上偶聯(lián)抗原，利用抗原與抗體的特異性**化學反應的原理來進行的，樣本中的喹乙醇和微孔條上預包被偶聯(lián)抗原競爭抗喹乙醇抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣品中的喹乙醇含量與樣品的吸光度值呈反比，與標準曲線比較即可得出喹乙醇含量。
【試劑盒技術(shù)指標】
規(guī) 格：96孔/盒
靈 敏 度： 0.05ppb
檢測時間： 75min
樣本檢測下限：
組 織………………………………15ppb
飼 料………………………………30ppb
交叉反應率：
喹乙醇……………………………… 100%
卡巴多………………………………﹤0.1%
喹乙醇試劑盒回收率：
組 織………………………………80%±15%
飼 料………………………………70%±15%
【試劑盒組成】
1、 微量測試孔：1×96孔板（12條×8孔）
2、 1ppm標準品濃縮液1瓶： 1ml/瓶
3、 酶標記物 12ml…………………紅色帽
4、 抗體工作液 7ml…………………綠色帽
5、 底物A液 7 ml…………………白色帽
6、 底物B液 7 ml…………………黑色帽
7、 終止液 7 ml…………………黃色帽
8、 20X濃縮洗滌液 40 ml…………透明帽
9、 5X濃縮復溶液 50 ml…………藍色帽
【所用儀器、試劑】
具備的儀器：微孔酶標儀、氮氣吹干裝置、打印機、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機、恒溫箱、天平（感量0.01g）、刻度移液管
微量移液器：單道20μl-200μl、100μl-1000μl、多道250μl
試 劑：甲醇、正己烷、去離子水（蒸餾水）
【樣本前處理步驟】
喹乙醇試劑盒樣本處理前須知
處理任何樣本時，都必須注意：
1、實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
2、實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。
樣本前處理需配制：
配液1、將5X濃縮復溶液用去離子水按照1：4稀釋（1 份濃縮復溶液+4份去離子水）用于樣品稀釋和標準應用液的配制。
配液2、樣品提取液配制取1ml甲醇與9ml去離子水混勻。( 1份甲醇+9份去離子水）
（a）組織（豬肝、豬肉、魚、蝦等）樣本的處理方法
1、 稱1±0.05g均質(zhì)后組織樣本于50ml離心管中，加入5ml樣品提取液充分混合30s,混勻,放置56度水浴10min；振蕩2min；室溫
4000r/min以上離心10min。
2、 取出上清液1ml于離心管中，加入1 ml正己烷充分混合30s；室溫4000r/min以上離心5min。
3、 取50 μl下層溶液與樣品稀釋液950ul 充分混合30s取50μl進行分析。
樣本稀釋倍數(shù)：100
（b）飼料樣品的處理方法
1、 將飼料樣品研碎，稱1.0±0.05g研碎的飼料樣品，加入10ml樣品提取液配制，充分混合30s,放置56度水浴10min,劇烈震蕩
2min，室溫4000r/min以上離心10min。
2、 取出上清液50ul與樣本稀釋液950ul 充分混合30s
3、 取50ul上清進行分析。
樣本稀釋倍數(shù):200
【酶標**分析程序】
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置室溫（20-25℃平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、配制標準液
制備喹乙醇標準應用液：
取一定量的1ppm標準品濃縮液,用樣品稀釋液并混合均勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標準液6：配制4.05ppb---4ul標準品濃縮液（1ppm）加980ul樣品稀釋液混勻；
標準液5：配制1.35ppb---300ul標準液6加600ul樣品稀釋液混勻；
標準液4：配制0.45ppb ----300ul標準液5加600ul樣品稀釋液混勻；
標準液3：配制0.15ppb ----300ul標準液4加600ul樣品稀釋液混勻；
標準液2：配制0.05ppb ----300ul標準液3加600ul樣品稀釋液混勻；
標準液1：配制0 ppb----直接用樣品稀釋液；
3、按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
4、配液：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水）或按所需用量配制洗滌液。
5、編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣品和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
6、加標準品/樣本50μl/孔到各自的微孔中，再加入50μl/孔的抗體工作液，用蓋板膜蓋板，輕輕振蕩混勻，37℃環(huán)境反應30min 。
7、取出微孔板，甩出孔內(nèi)液體，用洗滌液按250μl /孔洗板4-5次，每次浸泡15-30秒，用吸水紙拍干（拍干后未**的氣泡可用干凈的吸頭刺破）。
8、每孔加入酶標記物100μl/孔，用蓋板膜蓋板后，37℃環(huán)境中反應30min。取出酶標板，如前述洗板5次。
9、顯色：先加入底物液A液50μl/孔，再加入底物B液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，37℃環(huán)境中避光顯色反應15min。
10、測定：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定吸光度值（OD值）
喹乙醇試劑盒【結(jié)果判定】
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含喹乙醇的含量成負相關(guān)。
1、 粗略判定：
用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ppb)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.250，樣本2的吸光度值為0.720，標準液吸光度值分別是：0ppb為1.610；0.05ppb為1.380；0.15ppb為1.100；0.45ppb為0.620；1.35ppb為0.289；4.05ppb為0.108。則樣本1的濃度范圍是1.35ppb-4.05ppb； 樣本2的濃度范圍是0.15 ppb-0.45 ppb。乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中喹乙醇實際濃度。
2、定量分析：
所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以**個標準（0標準）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值
以標準品百分吸光率為縱坐標，以喹乙醇標準品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中喹乙醇實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣品的準確、快速分析。
3、標準曲線：
B/B0 (%)
0.05 0.15 0.45 1.35 4.05
Olaquindox (ppb) [μg/kg]
圖1：喹乙醇檢測試劑盒的回歸曲線
4、再現(xiàn)性：
%CV
Olaquindox (ppb) [μg/kg]
圖2：喹乙醇檢測試劑盒的精密度
由多個不同的實驗結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出喹乙醇檢測試劑盒的精密度情況，獲得的標準吸收值的變異系數(shù)（%CV）對相應喹乙醇濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。
【注意事項】
1、 使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標本沒有回到室溫（20-25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2、 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著出現(xiàn)標準曲線不成線性，重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行
下一步操作。
3、 混合要均勻，否則會出現(xiàn)重復性不好的現(xiàn)象。
4、 反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、 不要使用過了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號的盒中試劑。
6、 不用的微孔板放進自封袋密封；標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應當棄之。0標準的吸光度值小于0.5個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質(zhì)。
8、 該試劑盒*佳反應溫度為37℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
【儲存】
原包裝應儲存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。
【有效期】
有效期12個月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號見外包裝。
- 溫馨提示：為規(guī)避購買風險，建議您在購買前務(wù)必確認供應商資質(zhì)與產(chǎn)品質(zhì)量。
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