【產(chǎn)品簡介】

氯霉素是一種廣譜***，具有很好的**效果，常用于畜牧業(yè)生產(chǎn)中，然而，氯霉素會(huì)造人的再生障礙性貧血，而且誘發(fā)濃度還沒有確定，所以目前已經(jīng)禁止在動(dòng)物及食品中使用氯霉素。

氯霉素快速檢測試劑盒具有方便、快速、靈敏等特點(diǎn)，適用于大批量樣品快速檢測。

氯霉素試劑盒【測定原理】

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物氯霉素和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗氯霉素抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物氯霉素的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較可得出相應(yīng)殘留物氯霉素的含量。

【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】  

規(guī)      格：96孔/盒

靈 敏 度： 0.05ppb

檢測時(shí)間： 45min

樣本檢測下限：

水產(chǎn)品、動(dòng)物組織……………………… 0.05ppb

蜂蜜……………………………………… 0.05ppb

參考標(biāo)準(zhǔn)GB/T 20756-2006  檢測下限為0.1ppb

樣本回收率：

組織…………………………………………90%±15%

蜂蜜…………………………………………85%±15%             

交叉反應(yīng)率

氯霉素………………………………………………  100%

甲砜霉素…………………………………………… < 0.1%

氟甲砜霉素…………………………………………< 0.1%

氯霉素試劑盒【試劑盒組成】

1、 微量測試孔：1×96孔板（12條×8孔）

2、 標(biāo)準(zhǔn)液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb

3、  酶標(biāo)記物       7ml………………………紅色帽

4、  抗體工作液   7ml……………………   綠色帽

5、  底物 A 液      7ml……………………  棕色帽

6、  底物 B 液      7 ml…………………… 黑色帽

7、  終 止 液        7 ml…………………… 黃色帽

8、   20X濃縮洗滌液   40ml………………白色帽

9、   2X濃縮復(fù)溶液     50ml………………藍(lán)色帽

具備的儀器：微孔酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）

微量移液器：單道20μl-200μl，100μl-1000μl、多道250μl

試          劑：氫氧化鈉、乙酸乙酯、正己烷、磷酸氫二鉀、濃HCl

【實(shí)驗(yàn)前溶液配制】

配液1、將2X濃縮復(fù)溶液用去離子水按照1：1稀釋（1 份濃縮復(fù)溶液+1份去離子水）用于樣本的復(fù)溶。

配液2、將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照 1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。

配液3、 0.1MK₂HPO₄  稱11.4g K₂HPO₄·3H₂O加去離子水溶解定容至500ml。

配液4、1M HCl溶液取8.6ml濃HCl加去離子水定溶至100ml。

配液5、1M NaOH溶液取4gNaOH加去離子水定容至100ml。

氯霉素試劑盒【樣本前處理方法】  

樣本處理前須知

處理任何樣本時(shí)，都必須注意：

（a）本試劑盒所檢測的組織樣本包括：動(dòng)物組織、禽類和水產(chǎn)組織。eg:雞、鴨、豬、牛、羊、兔、魚、蝦等。

（b）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。

（c）實(shí)驗(yàn)前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)對實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

樣本前處理步驟：

樣本的處理方法：

（a）水產(chǎn)、組織、蜂蜜 (單一做氯霉素檢測時(shí)使用的前處理方法）

1、 用均質(zhì)器均質(zhì)組織樣本；

2、 稱3±0.05g樣本于離心管中，先加入3ml去離子水充分混勻再加入6ml乙酸乙酯，振蕩5min，室溫4000r/min以上，離心10min；

3、 取出4ml上層液體在氮?dú)饬?0-60℃水浴中干燥；

4、 加入1 ml正己烷溶解干燥的殘留物，再加1ml稀釋后的復(fù)溶液強(qiáng)烈振蕩混合30s，室溫4000r/min以上離心5min。

5、 取50 μl下層相用于分析。

樣本稀釋倍數(shù)：0.5    

 (b) 水產(chǎn)、組織、蜂蜜(氯霉素和硝基呋喃類四項(xiàng)檢測時(shí)使用的五合一前處理方法）

1、  取2±0.05g均質(zhì)樣本樣本，加入 4ml的去離子水，0.5ml1M HCl和100μl衍生化試劑，充分振蕩。

2、   置于37℃恒溫箱孵育過夜（大約16h）或56℃水浴中孵育2h；

3、   分別加入5ml 0.1M K₂HPO_4， 0.4 ml 1M NaOH和5ml乙酸乙酯，充分振蕩2min；

4、   在室溫下（20-25℃）4000r/min以上離心10min。

5、   取出2.5ml的乙酸乙酯到另一潔凈容器中于50℃氮?dú)?空氣吹干。

6、   用1ml正己烷溶解干燥物，用1ml已稀釋好的復(fù)溶液充分混合30s；在室溫下（20-25℃）4000r/min以上離心10min。

7、   取50μl下層用于分析。

樣本稀釋倍數(shù)：1

(備注：使用該五合一前處理方法檢測氯霉素，因存在一定的干擾；樣本檢測下限為0.3ppb）。

氯霉素試劑盒【酶標(biāo)**分析程序】 

1、  從4℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，置室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、  取出需要數(shù)量的微孔及框架，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。

3、  編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

4、  加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本 50μl/孔到各自的微孔中，加入酶標(biāo)記物50μl/孔,然后加入抗體50μl/孔，用蓋板膜封板，輕輕震蕩混勻。25℃環(huán)境中反應(yīng)30min。

5、  取出將孔內(nèi)液體甩干，用洗液250μl/孔洗板4-5次，每次間隔15-30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被**的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

6、  顯色：每孔加入底物A液50μl，再加底物B液50μl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色15min。

7、  測定：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定每孔OD值。

【結(jié)果判定】

結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含氯霉素成反比。

1、 粗略判定：

用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ppb)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.250，樣本2的吸光度值為0.720，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為1.610；0.05ppb為1.380；0.15ppb為1.100；0.45ppb為0.620；1.35ppb為0.289；4.05ppb為0.108。則樣本1的濃度范圍是1.35ppb-4.05ppb； 樣本2的濃度范圍是0.15 ppb-0.45 ppb。乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯霉素實(shí)際濃度。

2、  定量分析：

（1）百分吸光率計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以**個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100%，即

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B₀—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氯霉素實(shí)際濃度。若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來電索?。?

3、標(biāo)準(zhǔn)曲線：

   B/B0 (%)

           0.05           0.15            0.45          1.35          4.05

CAP(ppb) [μg/kg]

圖1： 氯霉素檢測試劑盒的回歸曲線

4、再現(xiàn)性：

%CV

CAP (ppb) [μg/kg]

     圖2：氯霉素檢測試劑盒的精密度

由多個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出氯霉素檢測試劑盒的精密度情況，獲得的標(biāo)準(zhǔn)吸收值的變異系數(shù)（%CV）對相應(yīng)氯霉素濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。

【 注意事項(xiàng)】

1、  使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒有回到室溫（20-25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

2、  在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

3、  混合要均勻，否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

4、  反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。

5、  不要使用過了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。

6、  不用的微孔板放進(jìn)自封袋密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。

7、  顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A_450nm< 0.5 ）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。

8、  該試劑盒*佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

【儲(chǔ)存】

 原包裝應(yīng)儲(chǔ)存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。

【有效期】

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