沙丁胺醇試劑盒

【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】

沙丁胺醇屬于β-興奮劑類(lèi)**，可提高胴體瘦肉率，曾被廣泛添加于飼料中。人食用了含沙丁胺醇?xì)埩舻膭?dòng)物性食品，會(huì)出現(xiàn)肌肉震顫、心悸、過(guò)敏、**目眩、惡心、嘔吐、發(fā)燒、顫栗等癥狀，世界各國(guó)已明文禁止其使用。常規(guī)儀器檢測(cè)方法不能滿(mǎn)足實(shí)際生產(chǎn)中大批量檢測(cè)的需求。沙丁胺醇快速檢測(cè)試劑盒具有方便、快速、靈敏等特點(diǎn)，適用于大批量樣品快速檢測(cè)。

沙丁胺醇試劑盒【測(cè)定原理】

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法檢測(cè)尿樣和組織等樣本中的沙丁胺醇，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，利用抗原與抗體的特異性**化學(xué)反應(yīng)的原理來(lái)進(jìn)行，樣本中的沙丁胺醇和微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)標(biāo)記有辣根過(guò)氧化酶的抗沙丁胺醇抗體，通過(guò)洗滌后，用TMB底物顯色，樣品中的沙丁胺醇含量與樣品的吸光度值呈反比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出沙丁胺醇含量。

【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】  

規(guī)      格：96孔/盒

靈 敏 度： 0.1ppb

檢測(cè)時(shí)間： 45min

尿      液………………………………… 0.1ppb

組      織（處理一）…………………… 0.4ppb

組      織（處理二）…………………… 0.1ppb

飼      料  ………………………………… 1ppb

交叉反應(yīng)率：

沙丁胺醇（Salbutamol ）………………  100%

萊克多巴胺（Ractopamine）……………… <0.1%

沙丁胺醇（Salbutamol ）…………………    <0.1%

多巴酚丁胺（dobutamine）………………   <0.1%

沙丁胺醇試劑盒樣本回收率：

尿     樣   ……………………… 85%±10%

組     織   ……………………… 85%±15%

飼     料   ……………………… 85%±15%

【試劑盒組成】

1、      微量測(cè)試孔：1×96孔板（12條×8孔）

2、      標(biāo)準(zhǔn)溶液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb

3、      酶標(biāo)記物      7ml……………………… 紅色帽

4、      抗體工作液  7ml……………………… 綠色帽

5、      底物A液     7ml  ……………………棕色帽

6、      底物B液     7ml  ……………………黑色帽

7、      終  止  液     7ml  ……………………黃色帽

8、      20X濃縮洗滌液40 ml  ………………白色帽

【 所用儀器、試劑】

具備的儀器：微孔酶標(biāo)儀、氮?dú)獯蹈裳b置、打印機(jī)、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機(jī)、恒溫箱、天平（感量0.01g）、刻度移液管

微量移液器：?jiǎn)蔚?0μl-200μl、100μl-1000μl、多道 250μl

試          劑： 乙腈、甲醇、正己烷、無(wú)水硫酸鈉

【實(shí)驗(yàn)前溶液配制】

配液1、將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋?zhuān)?份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。

沙丁胺醇試劑盒【樣本前處理步驟】

樣本處理前須知

 處理任何樣本時(shí)，都必須注意：

（a）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。

（c）實(shí)驗(yàn)前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

（a）尿樣本的處理方法

取50μl清亮尿樣直接測(cè)定（如果尿樣渾濁一定要過(guò)濾或離心10min，4000r/min，直至得到清亮尿樣），暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。

樣本稀釋倍數(shù)：1

（b）組織樣本的處理方法一

1、稱(chēng)2±0.05g組織，加入6ml去離子水，充分振蕩2min，室溫4000r/min以上離心10min。(注：若組織樣本中油脂含量較高，可在振蕩后放入85℃水浴10min后再離心)。

2、取50μl上清液進(jìn)行分析。

     樣本稀釋倍數(shù)：4

（c） 組織樣本（肌肉和肝臟）處理方法二

1、稱(chēng)取均勻后的組織樣本2±0.05g ，加入6ml乙腈溶液，充分振蕩2min。4000r/min以上，15℃離心10min；

2、取上清液4ml，在56℃條件下氮?dú)饣蚩諝饬鞔抵镣耆稍铮?

    肉樣本：加入1ml 去離子水混合振蕩30s，取50μl用于分析。

    肉樣本稀釋倍數(shù)：1

肝臟樣本：加入2ml正己烷振蕩溶解，再加入1ml 去離子水混合振蕩30s，4000r/min以上，15℃離心5min，去除上層；取50μl

下層 與50μl去離子水混勻；取50μl用于分析。

 肝樣本稀釋倍數(shù)：2

操作步驟：

1、將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20-25℃）平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃不要冷凍。

3、編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

4、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50μl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物50μl/孔，再加入抗體工作液50μl/孔。用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中反應(yīng)30min。

5、小心揭開(kāi)蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用去離子水250μl/孔充分洗滌4-5次，每次間隔15-30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被**的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

6、顯色：每孔加入底物A液50μl，再加底物B液50μl，輕輕振蕩混勻25℃環(huán)境避光顯色15min。

7、 測(cè)定：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處 （建議用雙波長(zhǎng)450/630nm，檢測(cè)在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)）測(cè)定每孔OD值。

沙丁胺醇試劑盒【結(jié)果判定】

結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含沙丁胺醇量成負(fù)相關(guān)。

1、用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。例如樣本1的吸光度值為0.311，樣本2的吸光度值為0.715，標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值分別是： 0ppb為1.642；0.1ppb為1.200；0.3ppb為0.780；0.9ppb為0.454； 2.7ppb為0.236；8.1ppb為0.142。則樣本1的濃度范圍是0.9ppb-2.7ppb，樣本2的濃度范圍是0.3ppb-0.9ppb。乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中沙丁胺醇的實(shí)際濃度。

2、定量分析

（1）百分吸光率的計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以**個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100%，即

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B₀—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以沙丁胺醇標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中沙丁胺醇的實(shí)際濃度。

若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來(lái)電索?。?

3、標(biāo)準(zhǔn)曲線：

B/B0 (%)

         0.1        0.3        0.9       2.7        8.1

(ppb) [μg/kg]

圖1：沙丁胺醇檢測(cè)試劑盒的回歸曲線

4、再現(xiàn)性：

   %CV

                       (ppb) [μg/kg]

圖2：沙丁胺醇檢測(cè)試劑盒的精密度

由多個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出沙丁胺醇檢測(cè)試劑盒的精密度情況，獲得的標(biāo)準(zhǔn)吸收值的變異系數(shù)（%CV）對(duì)相應(yīng)沙丁胺醇濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。

【注意事項(xiàng)】

1、使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒(méi)有回到室溫（20-25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

2、在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

3、混合要均勻，否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

4、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。

5、不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。

6、不用的微孔板放進(jìn)自封袋密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。

7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A_450nm< 0.5 ）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。

8、 該試劑盒*佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

【儲(chǔ)存】

 原包裝應(yīng)儲(chǔ)存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。

【有效期】

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