玉米赤霉烯酮試劑盒

【原理】

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物玉米赤霉烯酮與微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)其抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含玉米赤霉烯酮的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出殘留物玉米赤霉烯酮的含量。

【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】  

規(guī)      格：96孔/盒

靈 敏 度： 0.5ppb

檢測(cè)時(shí)間： 75min

玉米赤霉烯酮試劑盒樣本檢測(cè)下限：

飼    料（谷物、豆類(lèi)）…………………………50ppb

樣本回收率

飼    料（谷物、豆類(lèi)）……………………80% ±10%

試 劑 盒 組 成

1、微量測(cè)試孔：每條8孔，一板12條

2、標(biāo) 準(zhǔn) 液×6瓶：（1ml/瓶） 0ppb、 0.5ppb、

     1.5ppb、4.5ppb、 13.5ppb、 40.5ppb

3、酶標(biāo)記物     12ml  …………………………… 紅色帽

4、抗體工作液  7ml ……………………………… 綠色帽

5、底物A液      7ml ………………………………白色帽

6、底物B液  　 7 ml………………………………黑色帽

7、終止液       7 ml ………………………………黃色帽

8、5X濃縮復(fù)溶液  50 ml…………………………藍(lán)色帽

9、20X濃縮洗滌液 40 ml……………………… 透明帽

玉米赤霉烯酮試劑盒【所用儀器、試劑】  

具備的儀器：微孔酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量

                  0.01g）

微量移液器：?jiǎn)蔚?0μl-200μl，100μl-1000μl、多 道250μl，WhatmanＮｏ１或相當(dāng)?shù)臑V紙

試         劑：甲醇

【樣本前處理步驟】  

樣本前處理須知

處理任何樣本時(shí)，都必須注意：

（a）標(biāo)準(zhǔn)液含有玉米赤霉烯酮**，應(yīng)特別小心，使用過(guò)的玻璃容器及玉米赤霉烯酮溶液*好用pH7的次氯酸溶液（10%V/V）浸泡過(guò)夜。

（b）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。

（c）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

樣本前處理需配制：

配液1、70%甲醇溶液：30ml蒸餾水或去離子水和70ml純甲醇混合制備70％甲醇溶液。

配液2、樣本復(fù)溶液：將5×濃縮復(fù)溶液用去離子水以1：4稀釋?zhuān)? 份濃縮復(fù)溶液+1份去離子水），用于樣本提取后的復(fù)溶。

（a ）飼料（谷物、豆類(lèi)）

1、稱取1g粉碎的有代表性的樣品于離心管中，加入10ml 70%甲醇溶液混合；強(qiáng)力振蕩3分鐘。

2、用Whatman No.1濾紙過(guò)濾；收集過(guò)濾液。

3、取出上清液50ul與樣本稀釋液450ul 充分混合30s取50ul進(jìn)行分析。

        樣本稀釋倍數(shù):100

玉米赤霉烯酮試劑盒【酶標(biāo)**分析程序】  

測(cè)定前應(yīng)須知：

1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20-25℃）。

2、使用之后立即將所有試劑放回2-8℃環(huán)境。

3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。

4、在所有恒溫孵育過(guò)程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。

玉米赤霉烯酮試劑盒操作步驟：

1、   將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、   按板架及需要取出微孔條，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。

3、   配液：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋?zhuān)?份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌

       液。

4、  編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

5、  加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50μl/孔到各自的微孔中，然后加抗體50μl/孔，用蓋板膜封板，輕輕震蕩混勻。25℃環(huán)境中反應(yīng)30min。

6、  取出將孔內(nèi)液體甩干，用洗液250μl/孔洗板4-5次，每次間隔15-30秒，用吸水紙???干（拍干后未被**的氣泡可用干凈的槍頭刺

       破）。

7、  每孔加入酶標(biāo)記物100μl，蓋板膜蓋板后置25℃環(huán)境中反應(yīng)30min。將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌液充分洗，4-5遍（同上），用吸水

       紙拍干（拍干后未被**的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

8、   顯色：每孔加入A液50μl，再加B液50μl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色15min。

9、   測(cè)定：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè),在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)）測(cè)定吸

        光度值（OD值）。

  【結(jié)果判定】  

   結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法， 定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與玉米赤霉烯酮的含量成負(fù)相關(guān)。

1、 粗略判定

      用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng /ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值0.241，樣本2的吸光度值為0.785，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為2.260；0.5ppb為1.640；1.5ppb為1.234；4.5ppb為0.680； 13.5ppb為0.348；40.5ppb為0.125。則樣本1的濃度范圍是13.5ppb-40.5ppb；樣本2的濃度范圍是1.5ppb-4.5ppb。乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中玉米赤霉烯酮實(shí)際含量。

2、 定量分析

           （1）百分吸光率的計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以**個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100%，即：

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B₀—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以玉米赤霉烯酮濃度（ng /ml）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中玉米赤霉烯酮實(shí)際含量。

若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來(lái)電索?。?

3、  標(biāo)準(zhǔn)曲線：

B/B0 (%)

     0.5               1.5             4.5             13.5           40.5

 (ppb) [μg/kg]

圖1：玉米赤霉烯酮檢測(cè)試劑盒的回歸曲線

4、再現(xiàn)性：

    %CV

              0        0.5      1.5      4.5      13.5      40.5

(ppb) [μg/kg]

圖2：玉米赤霉烯酮檢測(cè)試劑盒的精密度

由多個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出玉米赤霉烯酮檢測(cè)試劑盒的精密度情況，獲得的標(biāo)準(zhǔn)吸收值的變異系數(shù)（%CV）對(duì)相應(yīng)玉米赤霉烯酮濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。

【注意事項(xiàng)】  

1、    使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒(méi)有回到室溫（20-25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

2、    在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行

         下一步操作。

3、    混合要均勻，否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

4、    反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。

5、    不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。

6、    不用的微孔板放進(jìn)自封袋密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。

7、    顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A_450nm< 0.5 ）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。

8、    該試劑盒*佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

【儲(chǔ)存】

 原包裝應(yīng)儲(chǔ)存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。

【有效期】

 有效期12個(gè)月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號(hào)見(jiàn)外包裝。

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