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產(chǎn)品資料

pKD46質(zhì)粒菌種大腸Red系統(tǒng)基因敲除質(zhì)粒

pKD46質(zhì)粒菌種大腸Red系統(tǒng)基因敲除質(zhì)粒
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  • 產(chǎn)品名稱:pKD46質(zhì)粒菌種大腸Red系統(tǒng)基因敲除質(zhì)粒
  • 產(chǎn)品型號:
  • 產(chǎn)品展商:XYbscience
  • 產(chǎn)品文檔:無相關(guān)文檔
簡單介紹
pKD46質(zhì)粒菌種大腸Red系統(tǒng)基因敲除質(zhì)粒質(zhì)粒是目前應(yīng)用*廣泛的Red同源重組質(zhì)粒,該質(zhì)粒含有受阿拉伯糖啟動子調(diào)控的exo、bet、gam基因,其復(fù)制子為低拷貝溫敏型復(fù)制子,便于質(zhì)粒的消除。pKD46質(zhì)粒菌種大腸Red系統(tǒng)基因敲除質(zhì)粒
產(chǎn)品描述
 

pKD46質(zhì)粒菌種大腸Red系統(tǒng)基因敲除質(zhì)粒

  • 產(chǎn)品信息
  • 基本信息
  • 質(zhì)粒簡介
  • 質(zhì)粒圖譜
  • 質(zhì)粒序列

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品貨號 產(chǎn)品名稱 產(chǎn)品規(guī)格 優(yōu)惠價
XY0098 pKD46質(zhì)粒菌種大腸Red系統(tǒng)基因敲除質(zhì)粒

100μl

¥請加QQ詢價

使用說明

信裕質(zhì)粒平臺的各批次質(zhì)粒菌株發(fā)貨前均經(jīng)過嚴(yán)格的多重驗證,如存在質(zhì)量問題,請在收到產(chǎn)品的三個月內(nèi)通知我司。收到質(zhì)粒后請短暫離心,加入20μl ddH2O溶解質(zhì)粒,取2μl轉(zhuǎn)化至對應(yīng)感受態(tài)中,挑取單克隆重新提取質(zhì)粒后使用。如需獲取其他詳細(xì)信息請登錄我司官網(wǎng)查詢。

基本信息

啟動子: araBAD promoter
復(fù)制子: pSC101 ori
終止子: λ tL3 terminator
原核抗性: 氨芐青霉素Amp
克隆菌株: 大腸桿菌DH5α
培養(yǎng)條件: 30℃
表達宿主: 大腸桿菌
誘導(dǎo)方式: 阿拉伯糖

質(zhì)粒簡介

        pKD46質(zhì)粒是目前應(yīng)用*廣泛的Red同源重組質(zhì)粒,該質(zhì)粒含有受阿拉伯糖啟動子調(diào)控的exo、bet、gam基因,其復(fù)制子為低拷貝溫敏型復(fù)制子,便于質(zhì)粒的消除。
與同源重組基因敲除相關(guān)的3個酶:
1、Exo蛋白
        Exo蛋白是一種核酸外切酶,單亞基的分子量為24 kD,Exo蛋白的活性形式是一種環(huán)狀三聚物分子,中間有一中空的通道,通道的一端可容納雙鏈DNA分子,另一端只可容納單鏈DNA。Exo蛋白可結(jié)合在雙鏈DNA的末端,從DNA雙鏈的5’端向3’端降解DNA,使DNA分子形成3’粘性末端。
2、Beta蛋白
        Beta蛋白在Red同源重組中起著決定性作用,具有介導(dǎo)互補單鏈DNA退火的功能,是一種退火蛋白,單亞基的分子量為25.8 kD。在溶液中,Beta蛋白自發(fā)地形成環(huán)狀結(jié)構(gòu),緊緊地結(jié)合在單鏈DNA的3’突出端,防止DNA被單鏈核酸酶降解,并介導(dǎo)互補單鏈DNA的退火。雙鏈DNA退火完成后,Beta蛋白從DNA雙鏈上解離下來。
3、Gam蛋白

        Gam蛋白為16kD的多肽分子,可與RecBCD核酸外切酶結(jié)合,抑制其對外源DNA的降解作用,防止外源DNA 進入細(xì)胞后被宿主降解。
參考文獻:

        [1] Datsenko KA1, Wanner BL. One-step inactivation of chromosomal genes in Escherichia coli K-12 using PCR products. Proc Natl Acad Sci USA. 2000,97(12):6640-6645.
        [2] Doublet B, Douard G, Targant H, et al. Antibiotic marker modifications of lambda Red and FLP helper plasmids, pKD46 and pCP20, for inactivation of chromosomal genes using PCR products in multidrug-resistant strains. J Microbiol Methods. 2008,75(2):359-361. Doi: 10.1016/j.mimet.2008.06.010

質(zhì)粒圖譜

質(zhì)粒序列

LOCUS       Exported                6329 bp ds-DNA     circular SYN 18-09-2015
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pKD46
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 6329)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported 2015-9-18 from SnapGene Viewer 2.8.1
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..6329
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     CDS             complement(11..889)
                     /codon_start=1
                     /gene="araC"
                     /product="L-arabinose regulatory protein"
                     /note="araC"
                     /translation="MAEAQNDPLLPGYSFNAHLVAGLTPIEANGYLDFFIDRPLGMKGY
                     ILNLTIRGQGVVKNQGREFVCRPGDILLFPPGEIHHYGRHPEAREWYHQWVYFRPRAYW
                     HEWLNWPSIFANTGFFRPDEAHQPHFSDLFGQIINAGQGEGRYSELLAINLLEQLLLRR
                     MEAINESLHPPMDNRVREACQYISDHLADSNFDIASVAQHVCLSPSRLSHLFRQQLGIS
                     VLSWREDQRISQAKLLLSTTRMPIATVGRNVGFDDQLYFSRVFKKCTGASPSEFRAGCE
                     EKVNDVAVKLS"
     promoter        916..1200
                     /gene="araBAD"
                     /note="araBAD promoter"
                     /note="promoter of the L-arabinose operon of E. coli; the 
                     araC regulatory gene is transcribed in the opposite 
                     direction (Guzman et al., 1995)"
     terminator      3129..3373
                     /note="lambda tL3 terminator"
                     /note="transcription terminator tL3 from phage lambda"
     CDS             complement(3496..4446)
                     /codon_start=1
                     /gene="rep101"
                     /product="protein needed for replication with the pSC101 
                     origin"
                     /note="Rep101"
                     /translation="MSELVVFKANELAISRYDLTEHETKLILCCVALLNPTIENPTRKE
                     RTVSFTYNQYAQMMNISRENAYGVLAKATRELMTRTVEIRNPLVKGFEIFQWTNYAKFS
                     SEKLELVFSEEILPYLFQLKKFIKYNLEHVKSFENKYSMRIYEWLLKELTQKKTHKANI
                     EISLDEFKFMLMLENNYHEFKRLNQWVLKPISKDLNTYSNMKLVVDKRGRPTDTLIFQV
                     ELDRQMDLVTELENNQIKMNGDKIPTTITSDSYLRNGLRKTLHDALTAKIQLTSFEAKF
                     LSDMQSKYDLNGSFSWLTQKQRTTLENILAKYGRI"
     rep_origin      4494..4716
                     /note="pSC101 ori"
                     /note="low-copy replication origin that requires the Rep101
                     protein"
     CDS             complement(5338..6198)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(6199..6303)
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
ORIGIN
        1 catcgattta ttatgacaac ttgacggcta catcattcac tttttcttca caaccggcac
       61 ggaactcgct cgggctggcc ccggtgcatt ttttaaatac ccgcgagaaa tagagttgat
      121 cgtcaaaacc aacattgcga ccgacggtgg cgataggcat ccgggtggtg ctcaaaagca
      181 gcttcgcctg gctgatacgt tggtcctcgc gccagcttaa gacgctaatc cctaactgct
      241 ggcggaaaag atgtgacaga cgcgacggcg acaagcaaac atgctgtgcg acgctggcga
      301 tatcaaaatt gctgtctgcc aggtgatcgc tgatgtactg acaagcctcg cgtacccgat
      361 tatccatcgg tggatggagc gactcgttaa tcgcttccat gcgccgcagt aacaattgct
      421 caagcagatt tatcgccagc agctccgaat agcgcccttc cccttgcccg gcgttaatga
      481 tttgcccaaa caggtcgctg aaatgcggct ggtgcgcttc atccgggcga aagaaccccg
      541 tattggcaaa tattgacggc cagttaagcc attcatgcca gtaggcgcgc ggacgaaagt
      601 aaacccactg gtgataccat tcgcgagcct ccggatgacg accgtagtga tgaatctctc
      661 ctggcgggaa cagcaaaata tcacccggtc ggcaaacaaa ttctcgtccc tgatttttca
      721 ccaccccctg accgcgaatg gtgagattga gaatataacc tttcattccc agcggtcggt
      781 cgataaaaaa atcgagataa ccgttggcct caatcggcgt taaacccgcc accagatggg
      841 cattaaacga gtatcccggc agcaggggat cattttgcgc ttcagccata cttttcatac
      901 tcccgccatt cagagaagaa accaattgtc catattgcat cagacattgc cgtcactgcg
      961 tcttttactg gctcttctcg ctaaccaaac cggtaacccc gcttattaaa agcattctgt
     1021 aacaaagcgg gaccaaagcc atgacaaaaa cgcgtaacaa aagtgtctat aatcacggca
     1081 gaaaagtcca cattgattat ttgcacggcg tcacactttg ctatgccata gcatttttat
     1141 ccataagatt agcggatcct acctgacgct ttttatcgca actctctact gtttctccat
     1201 acccgttttt ttgggaattc gagctctaag gaggttataa aaaatggata ttaatactga
     1261 aactgagatc aagcaaaagc attcactaac cccctttcct gttttcctaa tcagcccggc
     1321 atttcgcggg cgatattttc acagctattt caggagttca gccatgaacg cttattacat
     1381 tcaggatcgt cttgaggctc agagctgggc gcgtcactac cagcagctcg cccgtgaaga
     1441 gaaagaggca gaactggcag acgacatgga aaaaggcctg ccccagcacc tgtttgaatc
     1501 gctatgcatc gatcatttgc aacgccacgg ggccagcaaa aaatccatta cccgtgcgtt
     1561 tgatgacgat gttgagtttc aggagcgcat ggcagaacac atccggtaca tggttgaaac
     1621 cattgctcac caccaggttg atattgattc agaggtataa aacgaatgag tactgcactc
     1681 gcaacgctgg ctgggaagct ggctgaacgt gtcggcatgg attctgtcga cccacaggaa
     1741 ctgatcacca ctcttcgcca gacggcattt aaaggtgatg ccagcgatgc gcagttcatc
     1801 gcattactga tcgttgccaa ccagtacggc cttaatccgt ggacgaaaga aatttacgcc
     1861 tttcctgata agcagaatgg catcgttccg gtggtgggcg ttgatggctg gtcccgcatc
     1921 atcaatgaaa accagcagtt tgatggcatg gactttgagc aggacaatga atcctgtaca
     1981 tgccggattt accgcaagga ccgtaatcat ccgatctgcg ttaccgaatg gatggatgaa
     2041 tgccgccgcg aaccattcaa aactcgcgaa ggcagagaaa tcacggggcc gtggcagtcg
     2101 catcccaaac ggatgttacg tcataaagcc atgattcagt gtgcccgtct ggccttcgga
     2161 tttgctggta tctatgacaa ggatgaagcc gagcgcattg tcgaaaatac tgcatacact
     2221 gcagaacgtc agccggaacg cgacatcact ccggttaacg atgaaaccat gcaggagatt
     2281 aacactctgc tgatcgccct ggataaaaca tgggatgacg acttattgcc gctctgttcc
     2341 cagatatttc gccgcgacat tcgtgcatcg tcagaactga cacaggccga agcagtaaaa
     2401 gctcttggat tcctgaaaca gaaagccgca gagcagaagg tggcagcatg acaccggaca
     2461 ttatcctgca gcgtaccggg atcgatgtga gagctgtcga acagggggat gatgcgtggc
     2521 acaaattacg gctcggcgtc atcaccgctt cagaagttca caacgtgata gcaaaacccc
     2581 gctccggaaa gaagtggcct gacatgaaaa tgtcctactt ccacaccctg cttgctgagg
     2641 tttgcaccgg tgtggctccg gaagttaacg ctaaagcact ggcctgggga aaacagtacg
     2701 agaacgacgc cagaaccctg tttgaattca cttccggcgt gaatgttact gaatccccga
     2761 tcatctatcg cgacgaaagt atgcgtaccg cctgctctcc cgatggttta tgcagtgacg
     2821 gcaacggcct tgaactgaaa tgcccgttta cctcccggga tttcatgaag ttccggctcg
     2881 gtggtttcga ggccataaag tcagcttaca tggcccaggt gcagtacagc atgtgggtga
     2941 cgcgaaaaaa tgcctggtac tttgccaact atgacccgcg tatgaagcgt gaaggcctgc
     3001 attatgtcgt gattgagcgg gatgaaaagt acatggcgag ttttgacgag atcgtgccgg
     3061 agttcatcga aaaaatggac gaggcactgg ctgaaattgg ttttgtattt ggggagcaat
     3121 ggcgatgacg catcctcacg ataatatccg ggtaggcgca atcactttcg tctactccgt
     3181 tacaaagcga ggctgggtat ttcccggcct ttctgttatc cgaaatccac tgaaagcaca
     3241 gcggctggct gaggagataa ataataaacg aggggctgta tgcacaaagc atcttctgtt
     3301 gagttaagaa cgagtatcga gatggcacat agccttgctc aaattggaat caggtttgtg
     3361 ccaataccag tagaaacaga cgaagaatcc atgggtatgg acagttttcc ctttgatatg
     3421 taacggtgaa cagttgttct acttttgttt gttagtcttg atgcttcact gatagataca
     3481 agagccataa gaacctcaga tccttccgta tttagccagt atgttctcta gtgtggttcg
     3541 ttgtttttgc gtgagccatg agaacgaacc attgagatca tacttacttt gcatgtcact
     3601 caaaaatttt gcctcaaaac tggtgagctg aatttttgca gttaaagcat cgtgtagtgt
     3661 ttttcttagt ccgttacgta ggtaggaatc tgatgtaatg gttgttggta ttttgtcacc
     3721 attcattttt atctggttgt tctcaagttc ggttacgaga tccatttgtc tatctagttc
     3781 aacttggaaa atcaacgtat cagtcgggcg gcctcgctta tcaaccacca atttcatatt
     3841 gctgtaagtg tttaaatctt tacttattgg tttcaaaacc cattggttaa gccttttaaa
     3901 ctcatggtag ttattttcaa gcattaacat gaacttaaat tcatcaaggc taatctctat
     3961 atttgccttg tgagttttct tttgtgttag ttcttttaat aaccactcat aaatcctcat
     4021 agagtatttg ttttcaaaag acttaacatg ttccagatta tattttatga atttttttaa
     4081 ctggaaaaga taaggcaata tctcttcact aaaaactaat tctaattttt cgcttgagaa
     4141 cttggcatag tttgtccact ggaaaatctc aaagccttta accaaaggat tcctgatttc
     4201 cacagttctc gtcatcagct ctctggttgc tttagctaat acaccataag cattttccct
     4261 actgatgttc atcatctgag cgtattggtt ataagtgaac gataccgtcc gttctttcct
     4321 tgtagggttt tcaatcgtgg ggttgagtag tgccacacag cataaaatta gcttggtttc
     4381 atgctccgtt aagtcatagc gactaatcgc tagttcattt gctttgaaaa caactaattc
     4441 agacatacat ctcaattggt ctaggtgatt ttaatcacta taccaattga gatgggctag
     4501 tcaatgataa ttactagtcc ttttcctttg agttgtgggt atctgtaaat tctgctagac
     4561 ctttgctgga aaacttgtaa attctgctag accctctgta aattccgcta gacctttgtg
     4621 tgtttttttt gtttatattc aagtggttat aatttataga ataaagaaag aataaaaaaa
     4681 gataaaaaga atagatccca gccctgtgta taactcacta ctttagtcag ttccgcagta
     4741 ttacaaaagg atgtcgcaaa cgctgtttgc tcctctacaa aacagacctt aaaaccctaa
     4801 aggcttaagt agcaccctcg caagctcggt tgcggccgca atcgggcaaa tcgctgaata
     4861 ttccttttgt ctccgaccat caggcacctg agtcgctgtc tttttcgtga cattcagttc
     4921 gctgcgctca cggctctggc agtgaatggg ggtaaatggc actacaggcg ccttttatgg
     4981 attcatgcaa ggaaactacc cataatacaa gaaaagcccg tcacgggctt ctcagggcgt
     5041 tttatggcgg gtctgctatg tggtgctatc tgactttttg ctgttcagca gttcctgccc
     5101 tctgattttc cagtctgacc acttcggatt atcccgtgac aggtcattca gactggctaa
     5161 tgcacccagt aaggcagcgg tatcatcaac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc
     5221 acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa
     5281 ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta
     5341 ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt
     5401 tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag
     5461 tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca
     5521 gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc
     5581 tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt
     5641 tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag
     5701 ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt
     5761 tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat
     5821 ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt
     5881 gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc
     5941 ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat
     6001 cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag
     6061 ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt
     6121 ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg
     6181 gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta
     6241 ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc
     6301 gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctg
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