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產(chǎn)品名稱(chēng)：pET-25b
產(chǎn)品型號(hào)：
產(chǎn)品展商：XYbscience
產(chǎn)品文檔：無(wú)相關(guān)文檔

簡(jiǎn)單介紹

pET-25b是一種原核表達(dá)載體，C端含有一個(gè)6×His標(biāo)簽、HSV標(biāo)簽，N端含有一個(gè)pelB前導(dǎo)肽。該質(zhì)粒含有多個(gè)常用的酶切位點(diǎn)，便于不同基因克隆。表達(dá)由宿主細(xì)胞提供的T7 RNA聚合酶誘導(dǎo)，目的基因被克隆到質(zhì)粒載體上，受噬菌體強(qiáng)轉(zhuǎn)錄及翻譯信號(hào)控制。pET25b載體的單一的多克隆位點(diǎn)見(jiàn)上面的環(huán)狀質(zhì)粒圖譜。pET-25b注意：載體序列是以pBR322質(zhì)粒的編碼規(guī)矩進(jìn)行編碼的，所以T7蛋白表達(dá)區(qū)在質(zhì)粒圖譜上面是反向的。T7 RNA聚合酶啟動(dòng)的克隆和表達(dá)區(qū)域在質(zhì)粒圖譜中也被標(biāo)注了出來(lái)。質(zhì)粒的F1復(fù)制子是被定向的，所以在T7噬菌體聚合酶的作用下，包含有蛋白編碼序列的病毒粒子能夠產(chǎn)生，并啟動(dòng)蛋白表達(dá)，同時(shí)蛋白表達(dá)將被T7終止子序列的作用下終止蛋白翻譯。

產(chǎn)品描述

pET-25b

產(chǎn)品信息
基本信息
質(zhì)粒簡(jiǎn)介
質(zhì)粒圖譜
質(zhì)粒序列

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品貨號(hào)	產(chǎn)品名稱(chēng)	產(chǎn)品規(guī)格	優(yōu)惠價(jià)
XY0020	pET-25b	5μg	￥請(qǐng)?jiān)儍r(jià)

使用說(shuō)明

信裕質(zhì)粒平臺(tái)的各批次質(zhì)粒菌株發(fā)貨前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的多重驗(yàn)證，如存在質(zhì)量問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品的三個(gè)月內(nèi)通知我司。收到質(zhì)粒后請(qǐng)短暫離心，加入20μl ddH2O溶解質(zhì)粒，取2μl轉(zhuǎn)化至對(duì)應(yīng)感受態(tài)中，挑取單克隆重新提取質(zhì)粒后使用。如需獲取其他詳細(xì)信息請(qǐng)登錄我司官網(wǎng)查詢(xún)。

基本信息

啟動(dòng)子:	T7/lac
復(fù)制子:	ColE1 ori，F(xiàn)1 ori
終止子:	T7 terminator
質(zhì)粒分類(lèi):	大腸桿菌質(zhì)粒；大腸表達(dá)質(zhì)粒；pET系列質(zhì)粒
質(zhì)粒大小:	5547bp
質(zhì)粒標(biāo)簽:	N-pelB, C-HSV, C-6×His
原核抗性:	氨芐青霉素Amp（100μg/ml）
克隆菌株:	DH5α等大腸桿菌
培養(yǎng)條件:	37℃，有氧，LB
表達(dá)宿主:	BL21(DE3)等大腸桿菌
培養(yǎng)條件:	37℃，有氧，LB
誘導(dǎo)方式:	IPTG或乳糖及其類(lèi)似物
5'測(cè)序引物:	T7（TAATACGACTCACTATAGGG）
3'測(cè)序引物:	T7-ter（TGCTAGTTATTGCTCAGCGG）
備注:	分泌表達(dá)

質(zhì)粒簡(jiǎn)介

pET-25b質(zhì)粒是一種原核表達(dá)載體，C端含有一個(gè)6×His標(biāo)簽、HSV標(biāo)簽，N端含有一個(gè)pelB前導(dǎo)肽。該質(zhì)粒含有多個(gè)常用的酶切位點(diǎn)，便于不同基因克隆。表達(dá)由宿主細(xì)胞提供的T7 RNA聚合酶誘導(dǎo)，目的基因被克隆到質(zhì)粒載體上，受噬菌體強(qiáng)轉(zhuǎn)錄及翻譯信號(hào)控制。pET25b載體的單一的多克隆位點(diǎn)見(jiàn)上面的環(huán)狀質(zhì)粒圖譜。注意：載體序列是以pBR322質(zhì)粒的編碼規(guī)矩進(jìn)行編碼的，所以T7蛋白表達(dá)區(qū)在質(zhì)粒圖譜上面是反向的。T7 RNA聚合酶啟動(dòng)的克隆和表達(dá)區(qū)域在質(zhì)粒圖譜中也被標(biāo)注了出來(lái)。質(zhì)粒的F1復(fù)制子是被定向的，所以在T7噬菌體聚合酶的作用下，包含有蛋白編碼序列的病毒粒子能夠產(chǎn)生，并啟動(dòng)蛋白表達(dá)，同時(shí)蛋白表達(dá)將被T7終止子序列的作用下終止蛋白翻譯。
pET系統(tǒng)是有史以來(lái)在大腸桿菌中表達(dá)重組蛋白的功能*強(qiáng)大的系統(tǒng)，也是現(xiàn)今原核表達(dá)方面使用*廣泛的系統(tǒng)。該系列質(zhì)粒能很容易的通過(guò)降低誘導(dǎo)物的濃度來(lái)削弱蛋白表達(dá)。在非誘導(dǎo)條件下，可以使目的基因處于完全沉默狀態(tài)而不轉(zhuǎn)錄。

質(zhì)粒圖譜

質(zhì)粒序列

LOCUS       Exported                5547 bp ds-DNA     circular UNA 15-JUN-2017
DEFINITION natural circular DNA
KEYWORDS    pET-25b
SOURCE      natural DNA sequence
ORGANISM unspecified
REFERENCE   1 (bases 1 to 5547)
TITLE     Direct Submission
JOURNAL   Exported Thursday, June 15, 2017 from miaoling plasmid
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5547
                     /organism="unspecified"
                     /mol_type="genomic DNA"
   rep_origin      12..467
                     /direction=RIGHT
                     /note="f1 ori"
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        494..598
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
     CDS             599..1459
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      1630..2218
                     /direction=RIGHT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
                     replication"
     CDS             complement(2648..2839)
                     /codon_start=1
                     /gene="rop"
                     /product="Rop protein"
                     /note="rop"
                     /translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
                     DELYRSCLARFGDDGENL"
     CDS             complement(3648..4730)
                     /codon_start=1
                     /gene="lacI"
                     /product="lac repressor"
                    /note="lacI"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
                     relieved by adding lactose or
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
                     /translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
                     NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
                     EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
                     EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
                     MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
                     YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
                     ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
     promoter        complement(4731..4808)
                     /gene="lacI"
                     /note="lacI promoter"
     promoter        5117..5135
                     /note="T7 promoter"
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     protein_bind    5136..5160
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="lac operator"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
                     relieved by adding lactose or
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     CDS             5205..5270
                     /codon_start=1
                     /gene="pelB (fragment)"
                     /product="leader peptide for secretion"
                     /note="pelB signal sequence"
                     /translation="MKYLLPTAAAGLLLLAAQPAMA"
     CDS             5352..5384
                     /codon_start=1
                     /product="HSV (herpes simplex virus) epitope tag"
                     /note="HSV tag"
                     /translation="QPELAPEDPED"
     CDS             5391..5408
                     /codon_start=1
                     /product="6xHis affinity tag"
                     /note="6xHis"
                     /translation="HHHHHH"
     terminator      5475..5522
                     /note="T7 terminator"
                     /note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
                     polymerase"
ORIGIN
        1 tggcgaatgg gacgcgccct gtagcggcgc attaagcgcg gcgggtgtgg tggttacgcg
       61 cagcgtgacc gctacacttg ccagcgccct agcgcccgct cctttcgctt tcttcccttc
      121 ctttctcgcc acgttcgccg gctttccccg tcaagctcta aatcgggggc tccctttagg
      181 gttccgattt agtgctttac ggcacctcga ccccaaaaaa cttgattagg gtgatggttc
      241 acgtagtggg ccatcgccct gatagacggt ttttcgccct ttgacgttgg agtccacgtt
      301 ctttaatagt ggactcttgt tccaaactgg aacaacactc aaccctatct cggtctattc
      361 ttttgattta taagggattt tgccgatttc ggcctattgg ttaaaaaatg agctgattta
      421 acaaaaattt aacgcgaatt ttaacaaaat attaacgttt acaatttcag gtggcacttt
      481 tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt caaatatgta
      541 tccgctcatg agacaataac cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa ggaagagtat
      601 gagtattcaa catttccgtg tcgcccttat tccctttttt gcggcatttt gccttcctgt
      661 ttttgctcac ccagaaacgc tggtgaaagt aaaagatgct gaagatcagt tgggtgcacg
      721 agtgggttac atcgaactgg atctcaacag cggtaagatc cttgagagtt ttcgccccga
      781 agaacgtttt ccaatgatga gcacttttaa agttctgcta tgtggcgcgg tattatcccg
      841 tattgacgcc gggcaagagc aactcggtcg ccgcatacac tattctcaga atgacttggt
      901 tgagtactca ccagtcacag aaaagcatct tacggatggc atgacagtaa gagaattatg
      961 cagtgctgcc ataaccatga gtgataacac tgcggccaac ttacttctga caacgatcgg
     1021 aggaccgaag gagctaaccg cttttttgca caacatgggg gatcatgtaa ctcgccttga
     1081 tcgttgggaa ccggagctga atgaagccat accaaacgac gagcgtgaca ccacgatgcc
     1141 tgcagcaatg gcaacaacgt tgcgcaaact attaactggc gaactactta ctctagcttc
     1201 ccggcaacaa ttaatagact ggatggaggc ggataaagtt gcaggaccac ttctgcgctc
     1261 ggcccttccg gctggctggt ttattgctga taaatctgga gccggtgagc gtgggtctcg
     1321 cggtatcatt gcagcactgg ggccagatgg taagccctcc cgtatcgtag ttatctacac
     1381 gacggggagt caggcaacta tggatgaacg aaatagacag atcgctgaga taggtgcctc
     1441 actgattaag cattggtaac tgtcagacca agtttactca tatatacttt agattgattt
     1501 aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac
     1561 caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa
     1621 aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa caaaaaaacc
     1681 accgctacca gcggtggttt gtttgccgga tcaagagcta ccaactcttt ttccgaaggt
   1741 aactggcttc agcagagcgc agataccaaa tactgtcctt ctagtgtagc cgtagttagg
     1801 ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc tacatacctc gctctgctaa tcctgttacc
     1861 agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa gacgatagtt
     1921 accggataag gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc ccagcttgga
     1981 gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag ctatgagaaa gcgccacgct
     2041 tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg
     2101 cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca
     2161 cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc tatggaaaaa
     2221 cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt
     2281 ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgcctttg agtgagctga
     2341 taccgctcgc cgcagccgaa cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga
     2401 gcgcctgatg cggtattttc tccttacgca tctgtgcggt atttcacacc gcatatatgg
     2461 tgcactctca gtacaatctg ctctgatgcc gcatagttaa gccagtatac actccgctat
     2521 cgctacgtga ctgggtcatg gctgcgcccc gacacccgcc aacacccgct gacgcgccct
     2581 gacgggcttg tctgctcccg gcatccgctt acagacaagc tgtgaccgtc tccgggagct
     2641 gcatgtgtca gaggttttca ccgtcatcac cgaaacgcgc gaggcagctg cggtaaagct
     2701 catcagcgtg gtcgtgaagc gattcacaga tgtctgcctg ttcatccgcg tccagctcgt
     2761 tgagtttctc cagaagcgtt aatgtctggc ttctgataaa gcgggccatg ttaagggcgg
     2821 ttttttcctg tttggtcact gatgcctccg tgtaaggggg atttctgttc atgggggtaa
     2881 tgataccgat gaaacgagag aggatgctca cgatacgggt tactgatgat gaacatgccc
     2941 ggttactgga acgttgtgag ggtaaacaac tggcggtatg gatgcggcgg gaccagagaa
     3001 aaatcactca gggtcaatgc cagcgcttcg ttaatacaga tgtaggtgtt ccacagggta
     3061 gccagcagca tcctgcgatg cagatccgga acataatggt gcagggcgct gacttccgcg
     3121 tttccagact ttacgaaaca cggaaaccga agaccattca tgttgttgct caggtcgcag
     3181 acgttttgca gcagcagtcg cttcacgttc gctcgcgtat cggtgattca ttctgctaac
     3241 cagtaaggca accccgccag cctagccggg tcctcaacga caggagcacg atcatgcgca
     3301 cccgtggggc cgccatgccg gcgataatgg cctgcttctc gccgaaacgt ttggtggcgg
     3361 gaccagtgac gaaggcttga gcgagggcgt gcaagattcc gaataccgca agcgacaggc
     3421 cgatcatcgt cgcgctccag cgaaagcggt cctcgccgaa aatgacccag agcgctgccg
     3481 gcacctgtcc tacgagttgc atgataaaga agacagtcat aagtgcggcg acgatagtca
     3541 tgccccgcgc ccaccggaag gagctgactg ggttgaaggc tctcaagggc atcggtcgag
     3601 atcccggtgc ctaatgagtg agctaactta cattaattgc gttgcgctca ctgcccgctt
     3661 tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat cggccaacgc gcggggagag
     3721 gcggtttgcg tattgggcgc cagggtggtt tttcttttca ccagtgagac gggcaacagc
     3781 tgattgccct tcaccgcctg gccctgagag agttgcagca agcggtccac gctggtttgc
     3841 cccagcaggc gaaaatcctg tttgatggtg gttaacggcg ggatataaca tgagctgtct
     3901 tcggtatcgt cgtatcccac taccgagata tccgcaccaa cgcgcagccc ggactcggta
     3961 atggcgcgca ttgcgcccag cgccatctga tcgttggcaa ccagcatcgc agtgggaacg
     4021 atgccctcat tcagcatttg catggtttgt tgaaaaccgg acatggcact ccagtcgcct
     4081 tcccgttccg ctatcggctg aatttgattg cgagtgagat atttatgcca gccagccaga
     4141 cgcagacgcg ccgagacaga acttaatggg cccgctaaca gcgcgatttg ctggtgaccc
     4201 aatgcgacca gatgctccac gcccagtcgc gtaccgtctt catgggagaa aataatactg
     4261 ttgatgggtg tctggtcaga gacatcaaga aataacgccg gaacattagt gcaggcagct
     4321 tccacagcaa tggcatcctg gtcatccagc ggatagttaa tgatcagccc actgacgcgt
     4381 tgcgcgagaa gattgtgcac cgccgcttta caggcttcga cgccgcttcg ttctaccatc
     4441 gacaccacca cgctggcacc cagttgatcg gcgcgagatt taatcgccgc gacaatttgc
     4501 gacggcgcgt gcagggccag actggaggtg gcaacgccaa tcagcaacga ctgtttgccc
     4561 gccagttgtt gtgccacgcg gttgggaatg taattcagct ccgccatcgc cgcttccact
     4621 ttttcccgcg ttttcgcaga aacgtggctg gcctggttca ccacgcggga aacggtctga
     4681 taagagacac cggcatactc tgcgacatcg tataacgtta ctggtttcac attcaccacc
     4741 ctgaattgac tctcttccgg gcgctatcat gccataccgc gaaaggtttt gcgccattcg
     4801 atggtgtccg ggatctcgac gctctccctt atgcgactcc tgcattagga agcagcccag
     4861 tagtaggttg aggccgttga gcaccgccgc cgcaaggaat ggtgcatgca aggagatggc
     4921 gcccaacagt cccccggcca cggggcctgc caccataccc acgccgaaac aagcgctcat
     4981 gagcccgaag tggcgagccc gatcttcccc atcggtgatg tcggcgatat aggcgccagc
     5041 aaccgcacct gtggcgccgg tgatgccggc cacgatgcgt ccggcgtaga ggatcgagat
     5101 ctcgatcccg cgaaattaat acgactcact ataggggaat tgtgagcgga taacaattcc
     5161 cctctagaaa taattttgtt taactttaag aaggagatat acatatgaaa tacctgctgc
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pET-25b

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