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產(chǎn)品名稱：pCANTAB-5E(非空載)
產(chǎn)品型號(hào)：
產(chǎn)品展商：XYbscience
產(chǎn)品文檔：無相關(guān)文檔

簡(jiǎn)單介紹

pCANTAB-5E(非空載)是用于抗體基因表達(dá)，制備重組抗體。宿主菌 TG1 為質(zhì)粒載體pCANTAB5e 復(fù)制和表達(dá)的宿主菌，無抗性，用 2×YT 培養(yǎng)基，37℃進(jìn)行培養(yǎng)。載體 pCANTAB5e 為用于構(gòu)建重組單鏈抗體 scFv 的載體，具有氨芐抗性，大小為4522bp，具體圖譜及酶切位點(diǎn)如下示。輔助噬菌體 M13K07 用于拯救噬菌粒，具有卡那抗性，在其輔助下噬菌粒得以復(fù)制，并以融合的形式表達(dá)在噬菌體表面。pCANTAB-5E(非空載)在 scFv 基因后面含有一段編碼 Tag 尾肽（E-Tag）的序列，在尾肽后面有一琥珀（Amber）終止密碼子，位于 scFv 基因與 cpIII 基因之間，在抑制型** TG1 中，這種琥珀密碼子只有 20％有效，故在蛋白翻譯過程中可以通讀而形成 scFv-cpIII融合蛋白；

產(chǎn)品描述

pCANTAB-5E(非空載)

產(chǎn)品信息
基本信息
質(zhì)粒簡(jiǎn)介
質(zhì)粒圖譜
質(zhì)粒序列

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品貨號(hào)	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格	優(yōu)惠價(jià)
XY1099	pCANTAB-5E(非空載)	20μl	￥請(qǐng)加QQ詢價(jià)

使用說明

信裕質(zhì)粒平臺(tái)的各批次質(zhì)粒菌株發(fā)貨前均經(jīng)過嚴(yán)格的多重驗(yàn)證，如存在質(zhì)量問題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品的三個(gè)月內(nèi)通知我司。收到質(zhì)粒后請(qǐng)短暫離心，加入20μl ddH2O溶解質(zhì)粒，取2μl轉(zhuǎn)化至對(duì)應(yīng)感受態(tài)中，挑取單克隆重新提取質(zhì)粒后使用。如需獲取其他詳細(xì)信息請(qǐng)登錄我司官網(wǎng)查詢。

基本信息

啟動(dòng)子:	Lac/lac promoter
質(zhì)粒大小:	5216bp
質(zhì)粒標(biāo)簽:	N-g3 signal，C-E tag
原核抗性:	氨芐青霉素Amp
克隆菌株:	大腸桿菌Stbl3
培養(yǎng)條件:	37℃，有氧，LB

質(zhì)粒簡(jiǎn)介

本系統(tǒng)是用于抗體基因表達(dá)，制備重組抗體。宿主菌 TG1 為質(zhì)粒載體pCANTAB5e 復(fù)制和表達(dá)的宿主菌，無抗性，用 2×YT 培養(yǎng)基，37℃進(jìn)行培養(yǎng)。載體 pCANTAB5e 為用于構(gòu)建重組單鏈抗體 scFv 的載體，具有氨芐抗性，大小為4522bp，具體圖譜及酶切位點(diǎn)如下示。輔助噬菌體 M13K07 用于拯救噬菌粒，具有卡那抗性，在其輔助下噬菌粒得以復(fù)制，并以融合的形式表達(dá)在噬菌體表面。在 scFv 基因后面含有一段編碼 Tag 尾肽（E-Tag）的序列，在尾肽后面有一琥珀（Amber）終止密碼子，位于 scFv 基因與 cpIII 基因之間，在抑制型** TG1 中，這種琥珀密碼子只有 20％有效，故在蛋白翻譯過程中可以通讀而形成 scFv-cpIII融合蛋白；但在非抑制型菌株中，如 HB2151，此終止子被識(shí)別，同時(shí) scFv 基因在翻譯過程中在 cpIII 基因前終止，形成獨(dú)立的抗體蛋白，滯留于細(xì)胞膜間隙，并在長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)后泄漏在培養(yǎng)液中，形成可溶性表達(dá)。
【操作方法】本方法來源于網(wǎng)絡(luò)，本平臺(tái)未做實(shí)驗(yàn)證實(shí)，僅供參考。
1. 輔助噬菌體毒種制備
1) 將輔助噬菌體 M13K07 劃線于 2×YT 瓊脂平板上；
2) 制備 2×YT 半固體瓊脂（0.7％瓊脂）為上層瓊脂（Top Agar），冷卻至 50 ℃時(shí)，取 4 mL Top Agar 并加入 0.5 mL 過夜培養(yǎng)的新鮮 TG1 菌（OD660 達(dá) 0.8），充分混勻，沿著劃線濃度從低至高的方向，傾注 Top Agar；
3) 37℃培養(yǎng) 6-12 小時(shí)，用接種針挑取單個(gè)噬菌斑，接種于 30-200 mL 2×YT-K（kanamycin 70 μg/mL），37℃充分振蕩培養(yǎng) 10-14 小時(shí)；
4) 8000 rpm 離心 15 min，4 ℃；
5) 小心取上清，建議用 0.45μm 濾膜過濾后，分裝無菌小管，存放 4℃至少可用半年。
2．噬菌體毒種的滴定
1) 準(zhǔn)備不含任何***的 2×YT 培養(yǎng)平板 5-6 個(gè)；
2) 用 2×YT 培養(yǎng)基配制 0.7%瓊脂平板，即為表層瓊脂（Top Agar），冷卻至 42℃并在 42℃恒溫保存；
3) 將上述噬菌體溶液用培養(yǎng)基做 10-6、10-7、10-8、10-9、10-10 稀釋；
4) 取過夜培養(yǎng)的 TG1 菌液（OD660=1 左右），分裝小試管，500μL /小試管，標(biāo)明10-6 至 10-10 稀釋度；
備注：宿主菌的制備請(qǐng)參照 TG1 菌株說明書進(jìn)行。
5) 加入以上步驟 3 中依次稀釋的噬菌體 100μL 到每個(gè)相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)稀釋度的試管中，充分混勻，37℃輕柔振蕩反應(yīng) 30 min；
6) 加入 Top Agar 3 mL 至每個(gè)試管中，立即澆注事先準(zhǔn)備好的平皿，37℃培養(yǎng)過夜；
7) 計(jì)算平皿上的空斑數(shù)，乘于相應(yīng)稀釋倍數(shù)，一般濃度可達(dá) 1012pfu/mL。
【注意事項(xiàng)】
1．噬菌體毒種，在使用前應(yīng)按以上推薦的方法進(jìn)行濃度滴定；
2．噬菌體毒種存放在 4℃下即可，不可-20℃或更低溫度凍存；

質(zhì)粒圖譜

質(zhì)粒序列

LOCUS Exported 5216 bp ds-DNA circular SYN 27-OCT-2017

DEFINITION synthetic circular DNA

KEYWORDS pCANTAB-5E(非空載)

SOURCE synthetic DNA construct

ORGANISM synthetic DNA construct

REFERENCE 1 (bases 1 to 5216)

AUTHORS .

TITLE Direct Submission

http://www.miaolingbio.com

FEATURES Location/Qualifiers

source 1..5216

/organism="synthetic DNA construct"

/mol_type="other DNA"

promoter 96..200

/gene="bla"

/label=AmpR promoter

CDS 201..1061

/codon_start=1

/gene="bla"

/product="beta-lactamase"

/label=AmpR

/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and

related antibiotics"

/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI

ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS

PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW

EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA

LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS

LIKHW"

rep_origin 1232..1820

/direction=RIGHT

/label=ori

/note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of

replication"

promoter 2144..2174

/label=lac promoter

/note="promoter for the E. coli lac operon"

protein_bind 2182..2198

/label=lac operator

/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"

/note="The lac repressor binds to the lac operator to

inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be

relieved by adding lactose or

isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."

misc_feature 2218..2315

/label=g3 signal

misc_feature 2329..3066

/label=Stuffer(非空載）

misc_feature 3075..3120

/label=E tag

CDS 3520..4338

/codon_start=1

/label=fd gene 3

/translation="MFQNNRFRNRQGALTVYTGTVTQGTDPVKTYYQYTPVSSKAMYDA

YWNGKFRDCAFHSGFNEDPFVCEYQGQSSDLPQPPVNAGGGSGGGSGGGSEGGGSEGGG

SEGGGSEGGGSGGGSGSGDFDYEKMANANKGAMTENADENALQSDAKGKLDSVATDYGA

AIDGFIGDVSGLANGNGATGDFAGSNSQMAQVGDGDNSPLMNNFRQYLPSLPQSVECRP

YVFGAGKPYEFSIDCDKINLFRGVFAFLLYVATFMYVFSTFANILRNKES"

rep_origin complement(4560..5015)

/direction=LEFT

/label=f1 ori

/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow

indicates direction of (+) strand synthesis"

ORIGIN

1 gacgaaaggg cctcgtgata cgcctatttt tataggttaa tgtcatgata ataatggttt

61 cttagacgtc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt

121 tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat

181 aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc aacatttccg tgtcgccctt attccctttt

241 ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg

301 ctgaagatca gttgggtgct cgagtgggtt acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga

361 tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt ttccaatgat gagcactttt aaagttctgc

421 tatgtggcgc ggtattatcc cgtattgacg ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac

481 actattctca gaatgacttg gttgagtact caccagtcac agaaaagcat cttacggatg

541 gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg ccataaccat gagtgataac actgcggcca

601 acttacttct gacaacgatc ggaggaccga aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg

661 gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg

721 acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg

781 gcgaactact tactctagct tcccggcaac aattaataga ctggatggag gcggataaag

841 ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc cggctggctg gtttattgct gataaatctg

901 gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct

961 cccgtatcgt agttatctac acgacgggga gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac

1021 agatcgctga gataggtgcc tcactgatta agcattggta actgtcagac caagtttact

1081 catatatact ttagattgat ttaaaacttc atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga

1141 tcctttttga taatctcatg accaaaatcc cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt

1201 cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct

1261 gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc

1321 taccaactct ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc gcagatacca aatactgttc

1381 ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc

1441 tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg

1501 ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt

1561 cgtgcataca gcccagcttg gagcgaacga cctacaccga actgagatac ctacagcgtg

1621 agcattgaga aagcgccacg cttcccgaag ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg

1681 gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt

1741 atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag

1801 gggggcggag cctatggaaa aacgccagca acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt

1861 gctggccttt tgctcacatg ttctttcctg cgttatcccc tgattctgtg gataaccgta

1921 ttaccgcctt tgagtgagct gataccgctc gccgcagccg aacgaccgag cgcagcgagt

1981 cagtgagcga ggaagcggaa gagcgcccaa tacgcaaacc gcctctcccc gcgcgttggc

2041 cgattcatta atgcagctgg cacgacaggt ttcccgactg gaaagcgggc agtgagcgca

2101 acgcaattaa tgtgagttag ctcactcatt aggcacccca ggctttacac tttatgcttc

2161 cggctcgtat gttgtgtgga attgtgagcg gataacaatt tcacacagga aacagctatg

2221 accatgatta cgccaagctt tggagccttt tttttggaga ttttcaacgt gaaaaaatta

2281 ttattcgcaa ttcctttagt tgttcctttc tatgcggccc agccggccat ggcccaggtg

2341 aagctgcagc agtcaggacc tggcctggtg gcgccctcac agagcctgtc catcacatgc

2401 accgtctcag ggttttcatt aaccagctat ggtgtacact gggttcgcca gcctccagga

2461 aagggtctgg agtggctggg agtaatatgg gctggtggaa gcacaaacta taattcagct

2521 ctcaaatcca gactgaacat cagcaaggac aactccaaga gccaagtttt cttaaaaatg

2581 aacagtctcc aaactgatga cacagccatg tactactgtg ccagaaactg gggcagctac

2641 tggtacttcg atgtctgggg ccaaggccac ggtcaccgtc tcctcagtgg aggcggttca

2701 ggcggaggtg gcggaggtgg ctctggcggt ggcggatcgg acattgagct cacccagtct

2761 ccagcaatca tgtctgcatc tccaggggaa aaggtcacca tgacctgcag ggccagctca

2821 agtataagtt ccagttactt gcactggtac cagcagaagt caggcgcttc ccccaaaccc

2881 ttgattcata ggacatccaa cctggcttct ggagtcccag ctcgcttcag tggcagtggg

2941 tctgggacct cttactctct cacaatcagc agcgtggagg ctgaagatga tgcaacttat

3001 tactgccagc agtggagtgg ttacccattc acgttcggtg ctgggaccaa gctcgagatc

3061 aaacgggcgg ccgcaggtgc gccggtgccg tatccggatc cgctggaacc gcgtgccgca

3121 tagactgttg aaagttgttt agcaaaacct catacagaaa attcatttac taacgtctgg

3181 aaagacgaca aaactttaga tcgttacgct aactatgagg gctgtctgtg gaatgctaca

3241 ggcgttgtgg tttgtactgg tgacgaaact cagtgttacg gtacatgggt tcctattggg

3301 cttgctatcc ctgaaaatga gggtggtggc tctgagggtg gcggttctga gggtggcggt

3361 tctgagggtg gcggtactaa acctcctgag tacggtgata cacctattcc gggctatact

3421 tatatcaacc ctctcgacgg cacttatccg cctggtactg agcaaaaccc cgctaatcct

3481 aatccttctc ttgaggagtc tcagcctctt aatactttca tgtttcagaa taataggttc

3541 cgaaataggc agggtgcatt aactgtttat acgggcactg ttactcaagg cactgacccc

3601 gttaaaactt attaccagta cactcctgta tcatcaaaag ccatgtatga cgcttactgg

3661 aacggtaaat tcagagactg cgctttccat tctggcttta atgaggatcc attcgtttgt

3721 gaatatcaag gccaatcgtc tgacctgcct caacctcctg tcaatgctgg cggcggctct

3781 ggtggtggtt ctggtggcgg ctctgagggt ggcggctctg agggtggcgg ttctgagggt

3841 ggcggctctg agggtggcgg ttccggtggc ggctccggtt ccggtgattt tgattatgaa

3901 aaaatggcaa acgctaataa gggggctatg accgaaaatg ccgatgaaaa cgcgctacag

3961 tctgacgcta aaggcaaact tgattctgtc gctactgatt acggtgctgc tatcgatggt

4021 ttcattggtg acgtttccgg ccttgctaat ggtaatggtg ctactggtga ttttgctggc

4081 tctaattccc aaatggctca agtcggtgac ggtgataatt cacctttaat gaataatttc

4141 cgtcaatatt taccttcttt gcctcagtcg gttgaatgtc gcccttatgt ctttggcgct

4201 ggtaaaccat atgaattttc tattgattgt gacaaaataa acttattccg tggtgtcttt

4261 gcgtttcttt tatatgttgc cacctttatg tatgtatttt cgacgtttgc taacatactg

4321 cgtaataagg agtcttaata agaattcact ggccgtcgtt ttacaacgtc gtgactggga

4381 aaaccctggc gttacccaac ttaatcgcct tgcagcacat ccccctttcg ccagctggcg

4441 taatagcgaa gaggcccgca ccgatcgccc ttcccaacag ttgcgcagcc tgaatggcga

4501 atggcgcctg atgcggtatt ttctccttac gcatctgtgc ggtatttcac accgcatata

4561 aattgtaaac gttaatattt tgttaaaatt cgcgttaaat ttttgttaaa tcagctcatt

4621 ttttaaccaa taggccgaaa tcggcaaaat cccttataaa tcaaaagaat agcccgagat

4681 agggttgagt gttgttccag tttggaacaa gagtccacta ttaaagaacg tggactccaa

4741 cgtcaaaggg cgaaaaaccg tctatcaggg cgatggccca ctacgtgaac catcacccaa

4801 atcaagtttt ttggggtcga ggtgccgtaa agcactaaat cggaacccta aagggagccc

4861 ccgatttaga gcttgacggg gaaagccggc gaacgtggcg agaaaggaag ggaagaaagc

4921 gaaaggagcg ggcgctaggg cgctggcaag tgtagcggtc acgctgcgcg taaccaccac

4981 acccgccgcg cttaatgcgc cgctacaggg cgcgtactat ggttgctttg acgggtgcag

5041 tctcagtaca atctgctctg atgccgcata gttaagccag ccccgacacc cgccaacacc

5101 cgctgacgcg ccctgacggg cttgtctgct cccggcatcc gcttacagac aagctgtgac

5161 cgtctccggg agctgcatgt gtcagaggtt ttcaccgtca tcaccgaaac gcgcga

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