DNA提取 ：一、pCMV6-AN-His-HA實(shí)驗(yàn)原理
DNA是遺傳信息的載體，是*重要的生物信息分子，因此DNA的提取也是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)中*重要、*基本的操作之一。我公司提供從各種不同來(lái)源的樣品（如**、**、血液、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物組織及植物組織等）中提取高純度基因組DNA的服務(wù)。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1、細(xì)胞裂解
● CTAB法 CTAB（hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基**基溴化銨）是一種陽(yáng)離子去污劑，可融解細(xì)胞膜，并與核酸形成符合物。該復(fù)合物在高鹽溶液中（>0.7M NaCl）是可溶的，pCMV6-AN-His-HA通過(guò)有機(jī)溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來(lái)。此法多用于植物組織、**等材料。
● SDS法 SDS是一種陰離子去污劑，高溫（55℃-65℃）下可裂解細(xì)胞，使蛋白變性、染色體解析。常用于血液、**、酵母、動(dòng)物組織、細(xì)胞等樣品基因組DNA的提取。
● 其他方法 物理方法如機(jī)械剪切、超聲波破碎、勻漿等，化學(xué)方法如異硫氰酸胍、堿裂解、蛋白酶K消化等。
2、DNA分離純化
● 用酚/氯仿抽提裂解液，收集水相，乙醇沉淀DNA，*后用TE溶解DNA沉淀。
3、DNA的定量及檢測(cè)
● pCMV6-AN-His-HA瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA片段的分子質(zhì)量。
● 紫外分光光度計(jì)檢測(cè)DNA濃度 DNA在OD260處有顯著吸收峰，OD260值為1相當(dāng)于大約50ug/ml雙鏈DNA。提取的基因組DNA樣品濃度＝OD260×50ug/ml×稀釋倍數(shù)。
● 紫外分光光度計(jì)檢測(cè)DNA純度
一般用OD260/OD280值檢測(cè)DNA樣品的純度。OD260/OD280值約為1.7-1.9，說(shuō)明DNA純度較好；若小于1.7有可能有蛋白污染；若大于2.0，說(shuō)明有RNA污染或DNA已經(jīng)降解。
三、pCMV6-AN-His-HA樣品處理
因細(xì)胞結(jié)構(gòu)及所含成分不同，樣品預(yù)處理的方法也有差異。不同樣品的預(yù)處理方法大致如下：
● 植物組織——液氮研磨
● 動(dòng)物組織——?jiǎng)驖{、液氮研磨
● 培養(yǎng)細(xì)胞——蛋白酶K消化
● 細(xì) 菌——溶菌酶消化
● 酵 母——Lyticase消化、玻璃珠破碎
pCMV6-AN-His-HA注意：客戶*好提供新鮮的樣品或取樣后立即在低溫（-20℃或-70℃）冷凍保存的樣品，避免反復(fù)凍溶。
蛋白酶肽溶液1mLXY130533木瓜蛋白酶抑制劑溶液10mLXY100835胃蛋白酶抑制劑溶液1mLXY130545膦酰二肽溶液10mLXY100833PMSF溶液5mLXY131043CHAPS5gXY131044辛甲基β 葡糖苷1gXY131045辛甲基硫吡喃葡萄糖苷5gXY131046n-十二烷基-β-D-麥芽糖苷1gXY131047脫氧膽酸鈉5gXY131048膽酸鈉5gXY131049十二烷基磺酸鈉100gXY131050去垢劑去除樹(shù)脂10mLXY131051十二烷基磺酸鈉**劑25mLXY131052β- 巰基乙醇，蛋白級(jí)10mLXY131053蛋白級(jí)DTT5gXY131054免稱量蛋白級(jí)DTT48管XY131055TCEP 鹽酸膦1gXY131056TCEP 溶液5mLXY131120鹽酸胍溶液200mLXY131222咪唑溶液100mLXY131058咪唑25gXY131059亞氨二乙酸介質(zhì)10mLXY131061谷胱甘肽S 轉(zhuǎn)移酶1mgXY81216核酸**劑1.5mLXY81029非變性法蛋白沉淀試劑盒10次XY81217微量蛋白沉淀試劑盒50次XY61205血清白蛋白**劑15次XY100915SDS-PAGE預(yù)制膠12塊XY80810一站式SDS-PAGE電泳套裝30次XY100867SDS-PAGE濃縮膠配膠液500mLXY100868SDS-PAGE分離膠配膠液500mLXY81204SDS-PAGE上樣液10mLXY81203SDS-PAGE電泳液5L|20LXY100908一站式長(zhǎng)效期SDS-PAGE電泳套裝30次(A)|30次(B)XY100909長(zhǎng)效期SDS-PAGE配膠液200mLXY100910長(zhǎng)效期SDS-PAGE還原劑10mLXY100911長(zhǎng)效期SDS-PAGE上樣液1mLXY100912長(zhǎng)效期SDS-PAGE電泳液(干粉)20L(A)XY81205一站式Tricine-SDS-PAGE套裝30次XY81225Tricine-SDS-PAGE配膠液250mL|1000mLXY81213Tricine-SDS-PAGE上樣液1mL|5mLXY81214Tricine-SDS-PAGE陽(yáng)極電泳液(干粉)
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