DNA提取 ：一、pCMV6-AN-His-DDK實(shí)驗(yàn)原理
DNA是遺傳信息的載體，是*重要的生物信息分子，因此DNA的提取也是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)中*重要、*基本的操作之一。我公司提供從各種不同來源的樣品（如**、**、血液、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物組織及植物組織等）中提取高純度基因組DNA的服務(wù)。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1、細(xì)胞裂解
● CTAB法 CTAB（hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基**基溴化銨）是一種陽離子去污劑，可融解細(xì)胞膜，并與核酸形成符合物。該復(fù)合物在高鹽溶液中（>0.7M NaCl）是可溶的，pCMV6-AN-His-DDK通過有機(jī)溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。此法多用于植物組織、**等材料。
● SDS法 SDS是一種陰離子去污劑，高溫（55℃-65℃）下可裂解細(xì)胞，使蛋白變性、染色體解析。常用于血液、**、酵母、動(dòng)物組織、細(xì)胞等樣品基因組DNA的提取。
● 其他方法 物理方法如機(jī)械剪切、超聲波破碎、勻漿等，化學(xué)方法如異硫氰酸胍、堿裂解、蛋白酶K消化等。
2、DNA分離純化
● 用酚/氯仿抽提裂解液，收集水相，乙醇沉淀DNA，*后用TE溶解DNA沉淀。
3、DNA的定量及檢測(cè)
● pCMV6-AN-His-DDK瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA片段的分子質(zhì)量。
● 紫外分光光度計(jì)檢測(cè)DNA濃度 DNA在OD260處有顯著吸收峰，OD260值為1相當(dāng)于大約50ug/ml雙鏈DNA。提取的基因組DNA樣品濃度＝OD260×50ug/ml×稀釋倍數(shù)。
● 紫外分光光度計(jì)檢測(cè)DNA純度
一般用OD260/OD280值檢測(cè)DNA樣品的純度。OD260/OD280值約為1.7-1.9，說明DNA純度較好；若小于1.7有可能有蛋白污染；若大于2.0，說明有RNA污染或DNA已經(jīng)降解。
三、pCMV6-AN-His-DDK樣品處理
因細(xì)胞結(jié)構(gòu)及所含成分不同，樣品預(yù)處理的方法也有差異。不同樣品的預(yù)處理方法大致如下：
● 植物組織——液氮研磨
● 動(dòng)物組織——?jiǎng)驖{、液氮研磨
● 培養(yǎng)細(xì)胞——蛋白酶K消化
● 細(xì) 菌——溶菌酶消化
● 酵 母——Lyticase消化、玻璃珠破碎
pCMV6-AN-His-DDK注意：客戶*好提供新鮮的樣品或取樣后立即在低溫（-20℃或-70℃）冷凍保存的樣品，避免反復(fù)凍溶。
2mLXY100939福林酚試劑100mLXY90610卵白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品1mLXY131070牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品1mLXY131071牛血清γ 球蛋白標(biāo)準(zhǔn)品1mLXY131072預(yù)稀釋BSA 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品1mLXY131220預(yù)稀釋BGG 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品1mLXY131074SDS-PAGE 樣品預(yù)處理試劑盒50次XY131122考馬斯亮藍(lán)R-25010gXY131123考馬斯亮藍(lán)G-25010gXY131078天然蛋白A1mgXY131079重組蛋白A1mgXY131080重組蛋白G1mgXY131081重組蛋白A/G1mgXY131082重組蛋白L1mgXY131075糖蛋白染色試劑盒10次XY131076磷酸蛋白染色試劑盒10次XY131077組氨酸標(biāo)簽蛋白染色試劑盒10次XY80814Bradford法蛋白定量試劑盒100mL|200mLXY80815BCA法蛋白定量試劑盒500次XY80816超敏型BCA法蛋白定量試劑盒500次XY131069還原劑兼容型BCA蛋白定量試劑盒250次XY101102改良Lowry法蛋白定量試劑盒1000次XY80808蛋白酶抑制劑混合液2×0.5mLXY80809蛋白磷酸酶抑制劑混合液11mLXY130525蛋白磷酸酶抑制劑混合液25mLXY130526**專用蛋白酶抑制劑10mLXY130527哺乳動(dòng)物專用蛋白酶抑制劑1mLXY130528植物專用蛋白酶抑制劑1mLXY130529酵母專用蛋白酶抑制劑5mLXY130530His標(biāo)簽蛋白專用蛋白酶抑制劑10mLXY130531組織培養(yǎng)專用蛋白酶抑制劑1mLXY130543α2巨球蛋白25Inh.UXY130544AEBSF溶液5mLXY130534抗凝血酶Ⅲ溶液1mLXY130535APMSF溶液1mLXY100834胰蛋白酶抑制劑溶液10mLXY130536抑氨肽酶溶液5mLXY130537鈣蛋白酶抑制劑Ⅰ溶液10mLXY100538鈣蛋白酶抑制劑Ⅱ溶液10mLXY100539胰凝乳蛋白酶抑制劑溶液1mLXY130540二氯異香豆素溶液10mLXY130541E-64蛋白酶抑制劑溶液10mLXY100837EDTA溶液,0.5M,蛋白級(jí)10mLXY130532EGTA溶液10mLXY130542水蛭素溶液2000ATUXY100836亮抑
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