DNA提取 ：一、pcDNA5/FRT/V5-His/CAT實(shí)驗(yàn)原理
DNA是遺傳信息的載體，是*重要的生物信息分子，因此DNA的提取也是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)中*重要、*基本的操作之一。我公司提供從各種不同來源的樣品（如**、**、血液、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物組織及植物組織等）中提取高純度基因組DNA的服務(wù)。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1、細(xì)胞裂解
● CTAB法 CTAB（hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基**基溴化銨）是一種陽離子去污劑，可融解細(xì)胞膜，并與核酸形成符合物。該復(fù)合物在高鹽溶液中（>0.7M NaCl）是可溶的，pcDNA5/FRT/V5-His/CAT通過有機(jī)溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。此法多用于植物組織、**等材料。
● SDS法 SDS是一種陰離子去污劑，高溫（55℃-65℃）下可裂解細(xì)胞，使蛋白變性、染色體解析。常用于血液、**、酵母、動(dòng)物組織、細(xì)胞等樣品基因組DNA的提取。
● 其他方法 物理方法如機(jī)械剪切、超聲波破碎、勻漿等，化學(xué)方法如異硫氰酸胍、堿裂解、蛋白酶K消化等。
2、DNA分離純化
● 用酚/氯仿抽提裂解液，收集水相，乙醇沉淀DNA，*后用TE溶解DNA沉淀。
3、DNA的定量及檢測
● pcDNA5/FRT/V5-His/CAT瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA片段的分子質(zhì)量。
● 紫外分光光度計(jì)檢測DNA濃度 DNA在OD260處有顯著吸收峰，OD260值為1相當(dāng)于大約50ug/ml雙鏈DNA。提取的基因組DNA樣品濃度＝OD260×50ug/ml×稀釋倍數(shù)。
● 紫外分光光度計(jì)檢測DNA純度
一般用OD260/OD280值檢測DNA樣品的純度。OD260/OD280值約為1.7-1.9，說明DNA純度較好；若小于1.7有可能有蛋白污染；若大于2.0，說明有RNA污染或DNA已經(jīng)降解。
三、pcDNA5/FRT/V5-His/CAT樣品處理
因細(xì)胞結(jié)構(gòu)及所含成分不同，樣品預(yù)處理的方法也有差異。不同樣品的預(yù)處理方法大致如下：
● 植物組織——液氮研磨
● 動(dòng)物組織——?jiǎng)驖{、液氮研磨
● 培養(yǎng)細(xì)胞——蛋白酶K消化
● 細(xì) 菌——溶菌酶消化
● 酵 母——Lyticase消化、玻璃珠破碎
pcDNA5/FRT/V5-His/CAT注意：客戶*好提供新鮮的樣品或取樣后立即在低溫（-20℃或-70℃）冷凍保存的樣品，避免反復(fù)凍溶。
XY71207 RNA洗脫液 50mL
蛋白質(zhì)研究
XY80807動(dòng)物細(xì)胞裂解液50mL(A)|50mL(B)XY131006RIPA裂解液(強(qiáng))100mLXY131007RIPA裂解液(中)100mLXY131008RIPA裂解液(弱)100mLXY131009NP-40裂解液100mLXY90707動(dòng)植物總蛋白微量提取試劑盒50次XY91204動(dòng)植物膜蛋白微量制備試劑盒50次XY90613動(dòng)物細(xì)胞核蛋白微量制備試劑盒25次|100次XY91203一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒30次|100次XY121208液體樣品蛋白純化回收試劑盒50次XY81218植物總蛋白質(zhì)微量提取試劑盒(SDS-PAGE)30次XY81219植物總蛋白質(zhì)微量提取試劑(2DE)30次|100次XY81202**總蛋白質(zhì)微量提取試劑盒50次XY90902**總蛋白質(zhì)微量提取試劑盒30次XY100929**膜蛋白質(zhì)微量提取試劑盒50次XY131064細(xì)胞表面蛋白分離試劑盒8次XY131066磷酸化蛋白富集試劑盒10次XY131067ConA 糖蛋白分離試劑盒10次XY131205WGA 糖蛋白分離試劑盒10次XY90508包涵體微量純化試劑盒20次XY90509包涵體中量純化試劑盒5次XY90510包涵體大量純化試劑盒2次XY131121蛋白折疊試劑盒100次XY100302包涵體蛋白溶解及復(fù)性套裝100次XY100102一站式His標(biāo)記蛋白質(zhì)微量純化套裝20次(A)|20次(B)XY100101鎳柱介質(zhì)2mL|10mLXY131057鈷柱介質(zhì)10mLXY120801鎳柱原位再生試劑盒20次XY100202兔抗His標(biāo)簽多
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